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本文对暗纹东方鲀肝油的提取、成分分析及药理作用进行了较深入的研究,为暗纹东方鲀肝油的食品保健功能和药物开发研究奠定了应用基础,其主要研究结果概括如下:
1、将溶剂提取工艺应用于暗纹东方鲀肝油提取工艺的研究中,对二氯甲烷替代氯仿提取暗纹东方鲀肝油的可行性进行研究。结果表明,同等条件下,氯仿/甲醇和二氯甲烷/甲醇两种体系提取肝油,所测脂肪含量无显著性差异(P<0.05),所测脂肪的脂肪酸种类和对应脂肪酸含量也均无显著性差异(P<0.05)。因此,二氯甲烷替代氯仿提取暗纹东方鲀肝油是完全可行的。
2、在对传统提取工艺的优化研究中,本文初步探究了抽提时间、溶剂配比、清洗盐溶液种类和清洗次数4个因素对脂肪含量测定结果的影响。结果表明,单因素实验中,最佳提取条件分别:抽提时间12h,二氯甲烷与甲醇的体积比1∶1,清洗盐溶液CaCl2溶液,清洗次数1次。
3、溶剂提取法得到的暗纹东方鲀肝油外观是浅黄色半透明油状半固体,酸值为0.95,皂化值为179.8,碘值为139.7,过氧化值为0.13%。
4、通过气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术分析暗纹东方鲀肝油脂肪酸组成。检测结果可以确定7种脂肪酸,其中饱和脂肪酸有3种,分别为棕榈酸、硬脂酸和十四烷酸;不饱和脂肪酸有4种,分别为油酸、棕榈油酸、亚油酸和DHA。暗纹东方鲀肝油不饱和脂肪酸含量占总脂肪酸的56.533%,必需脂肪酸亚油酸(9-十八碳二烯酸)和DHA(二十二碳-4,7,10,13,16,19-六烯酸)含量占总脂肪酸的9.302%。其中DHA的含量远远高于野生暗纹东方鲀肝油。
5、在细胞水平上研究暗纹东方鲀肝油的抗癌作用。采用MTT法(噻唑蓝比色法)检测不同浓度暗纹东方鲀肝油对肝癌细胞Hep-G2生长的影响。通过研究发现,用不同浓度肝油处理癌细胞后,在一定范围内,Hep-G2细胞的生长抑制率随着暗纹东方鲀肝油浓度的增大而增加,最高抑制率高达93.31%。通过SPSS软件分析可知,暗纹东方鲀肝油的半抑制浓度IC50为3.16988g/L。
6、暗纹东方鲀肝油可以引起肝癌细胞Hep-G2生长形态的变化。不同浓度暗纹东方鲀肝油处理细胞后,在相差显微镜下可以观察到,从低浓度到高浓度,细胞逐渐出现分离,细胞膜凹陷,死亡等明显的细胞凋亡现象。在一定浓度范围内,细胞的凋亡进程随着药物浓度的增加而加快。药物达到一定浓度后,凋亡进程基本一致,细胞形态也不再发生变化。高浓度时可以明显看到细胞破碎为凋亡小体。由此可以推测,暗纹东方鲀肝油可以在肝癌细胞Hep-G2内通过一定的机制发挥药理作用,诱导细胞的凋亡,具有一定的抗癌作用。