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中介体复合物复合物是介于转录因子与RNA聚合酶Ⅱ之间,传递信息的集线器。当细胞受到环境及发育信号的影响时,不同的转录因子会与中介体复合物的特定亚基发生相互作用,后者招募RNA聚合酶Ⅱ及通用转录因子在基因启动子上聚集,形成预起始复合物,进而调控相关基因转录的水平。 研究蛋白质-蛋白质相互作用,可以从分子水平揭示蛋白质的功能。本课题从寻找与中介体复合物尾部亚基MED23有相互作用的新蛋白入手,通过亲和纯化结合质谱鉴定,发现一系列mRNA加工因子与体外表达纯化的可溶MED23具有相互作用,而与其他几个中介体亚基没有相互作用。其中一个mRNA加工因子,剪接因子hnRNP L,能够与MED23在体内体外发生特异性相互作用。核内定位显示MED23与hnRNP L以及核内剪接体复合物标志性蛋白有部分共定位,并且MED23能够免疫沉淀剪接机器的基本组分U1和U2snRNA,提示中介体复合物可能参与剪接体复合物的招募。在功能实验中,对细胞进行体内剪接实验,发现Med23的缺失对一部分hnRNP L调控的靶基因的可变剪接有影响,并与hnRNP L的调控方向一致。全基因组水平的外显子芯片结果表明,Med23和hnRNP L调控mRNA可变剪接,可变加尾的事件具有统计学意义上较高的相关性。进一步,染色质免疫沉淀.深度测序分析表明Med23能调控hnRNP L在共同靶基因启动子上的招募。另外,hnRNP L在转录水平也调控着Med23的靶基因,并且Med23和hnRNP L在斑马鱼内的缺失引起的发育异常表型相似。综上所述,本论文阐释了转录中介体复合物与mRNA加工机器的互作,为转录和mRNA加工的偶联现象提出了新的机制。