广藿香、穿心莲内生真菌抗菌菌株筛选及活性物质的分离

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内生真菌在与其宿主植物长期的协同进化中,能产生与宿主植物相同或相似的生理活性物质。广藿香Pogostemon cablin(Blanco)Benth和穿心莲Andrographispaniculata(Burm.f.)Nees.是广药中的道地药材,在临床上二者均具有清热解毒和抗菌消炎的药理功能。  本研究运用滤纸片法,以尖镰孢菌古巴专化型古巴专化型(Fusarium oxysporum f。sp.cubense)、胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)、大肠杆菌(Escherichia coli)、藤黄球菌(Micrococccus aureus)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)为指示菌对本实验室前期从广藿香和穿心莲植株中初步筛选到的627株活性菌株的发酵液进行复筛,得到3株活性较好的菌株D.Dmhr-1、D.Lthr-2、A.Lmcl-16,经形态和分子鉴定,分别为烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、深绿木霉(Trichoderma atroviride)、嗜松青霉(Penicillium pinophilum)。其中D.Dmhr-1对胶孢炭疽菌、金黄色葡萄球菌有活性,D.Lthr-2对尖镰孢菌古巴专化型、胶孢炭疽菌有活性,A.Lmcl-16对尖镰孢菌古巴专化型、胶孢炭疽菌、藤黄球菌、金黄色葡萄球菌均有活性。  用四种极性不同的有机溶剂对3株活性菌株的固体发酵物进行梯度萃取,用牛津杯法对萃取液进行活性检测,结果表明乙酸乙酯萃取活性最好,适于用作3株菌株发酵液的萃取剂。  采用牛津杯法对3株活性菌株的乙酸乙酯粗提物进行温度和酸碱稳定性测试,结果表明,D.Dmhr-1在·pH为1-10的条件下均对胶孢炭疽菌、金黄色葡萄球菌、藤黄球菌有活性,但热稳定性不好,在30℃就没有活性。D.Lthr-2的粗提物在30℃-80℃和pH为1-10的条件下均对胶孢炭疽菌有较好的活性。A.Lmcl-16的粗提物在30℃-121℃和pH为1-10的条件下均对尖镰孢菌古巴专化型、胶孢炭疽菌、藤黄球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌有不同程度的抑制作用。  采用硅胶层析结合TLC检测等方法分别对D.Dmhr-13.01g、D.Lthr-210.899g和A.Lmcl-1613g的乙酸乙酯粗提物进行分离纯化。D.Dmhr-1得到2个活性组分,组分F26对金黄色葡萄球菌有活性,组分F27对胶孢炭疽菌有活性。活性组分F26和F27经GC-MS检测到它们含有一种相同的主要化合物-2,4-二叔丁基苯酚。D.Lthr-2得到3个活性组分,组分F4、F6、F13均对尖镰孢菌古巴专化型和胶孢炭疽菌有活性。组分F4得到2个TLC单点组分,组分F6得到3个TLC单点组分,其中TLC单点组分F6552经GC-MS检测到2种主要的化合物-香紫苏醇和6-戊基2-吡喃酮。
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