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枯草芽孢芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是一种食品级微生物，具有较好的分泌能力，易于培养，基因操作相对简单并且发酵工艺也较为成熟等优点，因此它被认为是理想的外源蛋白表达宿主菌。分泌的蛋白质易于纯化，能简化下游的操作步骤，便于蛋白质的折叠，所以能以较低的成本获取可溶并有活性的目标蛋白质。枯草芽孢杆菌表达系统能分泌大量的蛋白质到细胞外，来源于不同生物的外源基因已经在枯草芽孢杆菌中实现了分泌表达。 本实验第一和第二部分通过枯草芽孢杆菌表达系统表达并纯化了金黄色葡萄球菌丝氨酸类蛋白酶B(SaSplB)。以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板，PCR扩增得到SplB基因，经过同源重组连接到表达载体pHTS-HIS上，然后转化到枯草芽孢杆菌感受态细胞中。经诱导条件优化，选取诱导前OD600为2.0、IPTG终浓度为0.5mmol/L、诱导4h的最优条件来发酵枯草芽孢杆菌，成功表达了金黄色葡萄球菌丝氨酸类蛋白酶B。经超滤浓缩培养液上清后过镍离子亲和层析柱进行纯化，结果成功纯化出了SaSplB蛋白。 本实验第三部分为了验证SaSplB蛋白是否具有剪切功能，所以构建了能表达带有Trp-Glu-Leu-Gln(W-E-L-Q)这4个位点的重组表达质粒，表达并纯化了带有W-E-L-Q位点并带有GST和His标签的树鼩的CD81的胞外大环(CD81 Largeextracellular loop简称， CD81LEL)蛋白。经SaSplB蛋白剪切此蛋白，成功剪切得到了不带标签的CD81LEL蛋白。说明本实验成功获得了具有剪切功能的金黄色葡萄球菌丝氨酸类蛋白酶B。 已有研究发现细胞表达的ApoE4A（第139位的丝氨酸突变为精氨酸）能显著增强HCV报告病毒的感染性，所以本研究第四部分通过枯草芽孢杆菌表达系统成功表达并纯化出了ApoE4A蛋白。为进一步研究ApoE与HCV之间的作用关系具有重要意义。