目的：
　　深入探讨HER2阳性的SKBR3乳腺癌细胞对来那替尼产生耐药的机制，并确定相关的耐药靶点，为临床上HER2阳性乳腺癌患者的治疗提供潜在的新靶点或者逆转其对来那替尼的耐药性。
　　方法：
　　利用HER2阳性的SKBR3细胞系加入来那替尼来构建耐药细胞株并命名为SKBR3_Re，之后通过高通量测序分析同时利用蛋白免疫印迹、RT-PCR、免疫荧光、核质分提等实验筛选出beta-catenin在耐药细胞株中高表达，用慢病毒进行敲低/过表达后通过MTT实验检测beta-catenin与来那替尼耐药性之间的关系，克隆形成实验检测细胞的增殖能力。加入放线菌酮、蛋白酶体抑制剂后western blotting实验检测beta-catenin蛋白降解的可能途径。用免疫共沉淀实验进行耐药细胞株泛素化的检测及Western blotting实验进行去泛素化酶的初步筛选鉴定。
　　结果：
　　(1)对筛选出的来那替尼耐药细胞株SKBR3-Re进行高通量测序并对数据进行分析发现Hippo、Wnt、TGF-β、p53、pI3K-AKT、NF-κB等信号通路都有基因富集，对这些信号通路相关基因的初步筛选，并通过RT-PCR及westernblotting进行验证后明确了与对照细胞相比耐药细胞株中的beta-catenin蛋白呈高表达状态。（2）通过免疫荧光实验及核质分提蛋白免疫印迹实验明确显示来那替尼耐药细胞株与对照组细胞相比其beta-catenin蛋白水平主要在细胞核中上调明显。（3）MTT实验和克隆形成实验显示，稳定过表达beta-catenin的SKBR3细胞对来那替尼的敏感性明显减弱，同时SKBR3细胞形成克隆的能力增强，另外，稳定敲低beta-catenin耐药细胞株SKBR3_Re对来那替尼的药物敏感性明显增强，而细胞形成克隆的能力明显减弱。（4）通过加入放线菌酮（用于检测beta-catenin蛋白降解的半衰期）及蛋白酶体抑制剂后进行western blotting实验及免疫共沉淀实验显示耐药细胞株中的beta-catenin的高表达与泛素蛋白酶体途径的异常调节相关。（5）利用蛋白免疫印迹实验初步筛选出了可能调控beta-catenin稳定性的去泛素化酶OTUD1。
　　结论：
　　1.HER2阳性的乳腺癌细胞对来那替尼产生耐药性与beta-catenin的高表达相关。
　　2.耐药细胞株中beta-catenin高表达与泛素-蛋白酶体途径相关。
　　3.初步筛选出去泛素化酶OTUD1可能参与调控beta-catenin的稳定性。