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目的:心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)是慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)患者的常见并发症和首位死亡原因,在CKD患者中CVD及死亡事件的发生存在节律变化,以清晨居多。高磷血症作为CKD患者常见的内环境紊乱之一,是CKD血压和心率节律异常的独立危险因素。血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)的过氧化物酶增殖物激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptor γ,PPARy)和转化生长因子 β 1(transforming growth factor β1,TGF-β1)是维持血管生物钟的重要因素。本研究旨在体外探讨高磷环境下,人主动脉血管平滑肌细胞(human aortic vascular smooth muscle cell,HASMC)中PPARγ及节律基因的变化,分析TGF-β1通路与PPARγ的互调关系,揭示降血磷和PPARγ激动剂对心血管节律紊乱的治疗意义,为解析CKD心血管并发症提供时间生物学的新思路。方法:实验分为:(1)正常对照组(1.0 mmol/L磷)、高磷组(2.5 mmol/L磷)、罗格列酮组(10 μmol/L)、高磷+罗格列酮组(10 μmol/L)(n=3);(2)正常对照组(1.0 mmol/L 磷)、高磷组(2.5 mmol/L 磷)、TGF-β1 中和抗体组(10 μg/ml)、高磷+TGF-β1中和抗体组(10 μg/ml)(n=3)。所有细胞同时干预,从开始处理细胞起时间计为0h,以后每4小时收集一次细胞,共观察28小时。实时定量聚合酶链式反应(quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测不同时间点各组细胞中PPARγ、Bmal1、Per2、Rev-erbα、TGF-β1的表达量变化。结果:正常情况下,HASMC中PPARγ以及节律基因Bmal1、Per2、Rev-erbα的mRNA表达存在节律性。高磷环境抑制上述基因的表达,从而破坏HASMC的正常生物节律。罗格列酮激活PPARγ后,节律基因表达上调,并可阻断高磷环境对上述基因的抑制作用。另外,正常情况下TGF-β1在HASMC的表达亦存在节律性。高磷环境可促进TGF-β1的分泌,当TGF-β1中和抗体阻断其信号通路后,PPARγ以及节律基因的表达均上调,并可阻断高磷环境对PPARγ以及Per2的抑制作用。结论:正常情况下,在HASMC中PPARy以及节律基因Bmal1、Per2、Rev-erbα的mRNA表达存在昼夜节律,高磷环境通过抑制PPARγ破坏HASMC的正常生物节律。高磷环境促进HASMC分泌TGF-βl,TGF-β1中和抗体可拮抗高磷对HASMC PPARγ及节律基因Per2的抑制,但TGF-β1中和抗体对Bmal1、Rev-erbα的作用不明显,其机制还有待深入研究。目的:通过调整腺嘌呤饮食中的钙磷水平,建立慢性肾脏病伴高磷血症的小鼠模型以供研究。方法:将雄性C57BL/6小鼠分为单纯腺嘌呤饮食法的正常对照组(钙1.0%,磷0.6%)、单纯腺嘌呤饮食法的造模组(0.2%腺嘌呤,钙1.0%,磷0.6%);腺嘌呤联合高磷饮食法的正常对照组(钙0.8%,磷0.6%)、腺嘌呤联合高磷饮食法的造模组(0.2%腺嘌呤,钙0.6%,磷1.0%)(n=7)。分别于造模前、造模4周记录体重,检测血清尿素氮(BUN)、钙(Ca)、磷(P)水平,4周后取肾脏组织行苏木精-伊红(HE)染色、马松(Masson)染色观察肾脏病理变化,RT-PCR检测肾纤维化指标包括I型胶原蛋白(Collagen I)、纤连蛋白(FN)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1),以及包括肿瘤坏死因子α(TNF α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)等炎症因子的表达情况。结果:与正常对照组比,单纯腺嘌呤饮食的造模组4周时体重降低,血BUN明显升高,为(41.15±4.59 mmol/L);Ca、P轻度升高,分别为(2.62±0.16 mmol/L)、(2.22±0.26 mmol/L)(P<0.05)。腺嘌呤联合高磷饮食造模4周时血BUN(14.68±3.57 mmol/L)轻度升高、P(2.97±0.29 mmol/L)明显升高(P<0.05),血Ca水平无明显差异。病理染色显示两组模型小鼠肾脏均出现不可逆病变。RT-PCR显示造模组小鼠肾脏组织中Collagen I、FN、PAI-1、TNFα、IL-1β、ICAM-1表达水平升高。结论:腺嘌呤联合高磷饮食饲喂C57BL/6小鼠4周即可建立高磷血症模型,同时伴有轻度肾功能下降、肾脏纤维化,是制备慢性肾脏病伴高磷血症小鼠模型的可行方法。