论文部分内容阅读
第一部分hepa CAM和FOXO3在膀胱癌中的表达及相关性目的收集临床标本研究肝细胞粘附分子(hepa CAM)和叉头框转录因子O亚族3(FOXO3)在膀胱癌(BCa)中的表达及相关性。方法收集22例膀胱癌患者癌组织标本和14例癌旁正常组织标本,免疫组织化学染色法(IHC)检测hepa CAM和FOXO3的表达量。正置显微镜下成像,统计学方法分析hepa CAM和FOXO3蛋白在膀胱癌中的表达量与各种临床参数之间的关系以及二者表达量相关性。结果hepa CAM和FOXO3在膀胱癌中均显示出表达缺失的现象,在癌旁正常组织中高表达。统计分析得出,hepa CAM和FOXO3在膀胱癌中的表达呈负相关性(r=0.898,p<0.01),而其二者与相关临床参数无关(p>.05)。结论FOXO3蛋白在膀胱癌组织中表达减低,且与hepa CAM的表达正相关,这一结果为hepa CAM对FOXO3在膀胱癌中的调节关系的探究奠定了临床实验基础。第二部分hepa CAM下调AKT/FOXO抑制膀胱癌细胞增殖机制目的研究过表达hepa CAM基因在膀胱癌细胞中对AKT/FOXO信号分子以及增殖相关蛋白的调节作用,并且用AKT信号的小分子抑制剂LY294002与hepa CAM过表达腺病毒联合使用,进一步发现hepa CAM通过AKT/FOXO阻止膀胱癌T24、BIU-87细胞株增殖及生长活性的分子信号机制。方法利用Western blot验证过表达hepa CAM时p-AKT,p-FOXO1和p-FOXO3及增殖相关蛋白CDK2和PCNA表达改变;细胞免疫荧光(IF)检测FOXO3在膀胱癌T24,BIU-87细胞株核浆的定位情况,同时用western blot进行定量验证。噻唑蓝(MTT)法鉴定LY294002对BIU-87、T24细胞生长活力的影响,并且检测hepa CAM与LY294002联合运用时膀胱癌细胞的生长抑制情况;克隆形成检测hepa CAM与LY294002联用对膀胱癌细胞BIU-87、T24增殖的影响;Western blot实验检测hepa CAM和LY294002联用p-AKT、p-FOXO1、p-FOXO3、CDK2和PCNA的表达改变,统计定量分析结果。结果在膀胱癌T24、BIU-87细胞中,过表达hepa CAM明显减弱p-AKT,p-FOXO1,p-FOXO3以及小分子蛋白CDK2和PCNA的表达(P<0.05);细胞免疫荧光及western blot结果证明,hepa CAM促进FOXO3的核转位,使FOXO3在细胞核中的表达量升高而在细胞浆中减弱。随着LY294002浓度的增加和处理时间的延长,膀胱癌BIU-87、T24细胞的生长明显被抑制,而hepa CAM与LY294002联用较hepa CAM或LY294002单独使用更加显著地抑制了细胞的增长;克隆形成实验证明,与hepa CAM或LY294002分别使用相比,二者联合使细胞增殖显著降低(P<0.05);Western blot显示,hepa CAM与LY294002联用更明显地增强了单独使用LY294002对p-AKT、p-FOXO1、p-FOXO3、CDK2和PCNA表达的抑制作用。结论过表达hepa CAM通过促进FOXO3的核转位,下调AKT/FOXO信号抑制膀胱癌T24和BIU-87细胞的增殖及生长。