第一部分 ADIPOR2基因多态性与颈动脉粥样硬化以及动脉粥样硬化血栓形成性脑梗死的相关性研究　　研究背景:动脉粥样硬化(AS)是脑梗死发病机制中一个重要的病理基础。脂联素(APN)被认为是一个对机体有保护作用的脂肪因子，APN通过它的特殊受体调节糖和脂类代谢从而起到抗动脉粥样硬化、抗炎、提高胰岛素敏感性、能量平衡以及维持糖和脂肪代谢等重要作用。因此，APN和胰岛素抵抗以及细胞炎性因子白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-a(TNF-a)这些因素密切相关，而这些因素与动脉粥样硬化性血栓形成性脑梗死及其危险因素之间存在有广泛复杂的联系。由于脂联素是通过脂联素受体发挥各种生物功能的，因此脂联素受体基因(ADIPOR)可能是动脉粥样硬化血栓形成性脑梗死的易感基因。　　研究目的:　　1.探讨脂联素受体2(ADIPOR2)基因多态性和动脉粥样硬化血栓形成性脑梗死风险的相关性。　　2.探讨脂联素受体2(ADIPOR2)基因多态性与血清中APN水平以及颈动脉内膜-中层厚度(IMT)、胰岛素敏感指数(IAI)、血清中炎症细胞因子TNF-a和IL-6水平的关系。　　研究方法:采用病例对照研究，以中国汉族人为研究对象，选择动脉粥样硬化血栓形成性脑梗死患者300例为观察组，同时选择年龄、性别相匹配的300例健康者为对照组。采用彩色多普勒超声仪，观察双侧颈总动脉起始部、主干及颈动脉分叉部、颈内外动脉主干血管内膜有无斑块及斑块性质、数目及大小。同时测量内膜中层厚度(IMT)。（通常以IMT≤1.0mm为正常，1.1mm≥IMT＞1.0mm为内膜增厚，IMT＞1.1 mm表示斑块形成，根据斑块性质，分为稳定斑块和易损斑块。）胰岛素抵抗评价用胰岛素敏感性指数(IAI)进行表示，即将空腹血糖、空腹胰岛素乘积的倒数转变成自然对数。血清APN、TNF-a、IL-6浓度测定均采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法进行检测。基因组分型采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)。抽取肘静脉血白细胞提取基因组DNA，PCR-RFLP多态性的分析方法分析ADIPOR2基因多态性。统计学处理采用SPSS17.0统计软件，计量资料检验应用t检验，计数资料的检验应用X2检验。Hardy-Weinberg均衡（H-W平衡）应用拟和优度X2检验，采用采用单因素方差分析进行各组间同一项检验指标的组间比较，采用LSD检验进行多重比较，采用Logistic回归分析计算OR和95％可信区间，采用Pearson相关分析进行相关性分析。P＜0.05为有统计学意义。　　研究结果:ADIPOR2基因rs12342基因型和等位基因频率在两组间的分布差异有统计学意义。rs12342 AA基因型在观察组中为41.30％，明显高于对照组30.67％，差异有统计学意义，A等位基因频率在观察组中为0.648，明显高于对照组0.545，差异有统计学意义。AA基因型比GG基因型增加动脉粥样硬化血栓形成性脑梗死发病率1.835倍(OR=1.835，95％ CI:1.397～2.691;P=0.012)。校正各种混杂因子的影响，两组间仍有显著性差异。观察组中各基因型亚组IMT、TNF-a、IL-6水平与对照组比较均升高，APN、IAI水平与对照组比较均降低，差异均有统计学意义;观察组AA、AG基因型较GG基因型IMT、TNF-a、IL-6水平均显著增高，APN、IAI水平均显著降低。采用Pearson相关分析，APN与IMT、TNF-α和IL-6水平显著负相关。APN与IAI水平显著正相关。　　研究结论:　　1.ADIPOR2基因rs12342变异和中国汉族人动脉粥样硬化血栓形成性脑梗死的发病有关。rs12342AA基因型和A等位基因频率可以增加动脉粥样硬化血栓形成性脑梗死的风险。　　2.ADIPOR2基因rs12342AA基因型动脉粥样硬化血栓形成性脑梗死患者可能通过显著降低血清APN水平，从而对TNF-α、IL-6等炎性因子抑制减轻，使血清中TNF-α、IL-6水平增加，加重了胰岛素抵抗，IMT明显增厚，促进了动脉粥样硬化的形成，增加了脑梗死的发生。　　第二部分 SAA1的基因多态性与颈动脉粥样硬化以及动脉粥样硬化血栓形成性脑梗死的相关性研究　　研究背景:AS是脑梗死发病机制中一个重要的病理基础。血清淀粉样蛋白A(SAA)是一种存在于血浆中的急性期蛋白，它能够取代apoA-I与高密度脂蛋白结合，从而对高密度脂蛋白的逆胆固醇转运产生影响。SAA也是一个与肥胖、胰岛素抵抗和2型糖尿病有着密切的关系的脂肪源性的炎症因子，在发生组织损伤、炎症以及感染时，SAA的合成显著增加。在一系列的体外细胞实验中发现SAA能够上调IL-6和白介素-8(IL-8)、TNF-a以及MCP-1等多种炎症相关因子的表达，而这些炎症因子均参与了AS的发生，由此推测SAA这一炎性蛋白应该在AS的发病过程中起到了比较重要的作用。SAA1亚型始终是SAA的主要组分，决定着总SAA蛋白的作用水平。因此，SAA1与胰岛素抵抗、TNF-a、IL-6这些与AS的发生相关的因素有着密切关系，而这些因素与动脉粥样硬化血栓形成性脑梗死存在有广泛复杂的联系，我们推测SAA1基因可能与动脉粥样硬化血栓形成性脑梗死的发生具有相关性。　　研究目的:　　1.探讨血清淀粉样蛋白A1（SAA1）基因多态性和动脉粥样硬化血栓形成性脑梗死风险的相关性。　　2.探讨SAA1基因多态性与血清中SAA水平以及IMT、IAI、血清中炎症细胞因子TNF-a和IL-6水平的关系。　　研究方法:采用病例对照研究，以中国汉族人为研究对象，选择动脉粥样硬化血栓形成性脑梗死患者300例为观察组，同时选择年龄、性别相匹配的300例健康者为对照组。采用彩色多普勒超声仪，观察双侧颈总动脉起始部、主干及颈动脉分叉部、颈内外动脉主干血管内膜有无斑块及斑块性质、数目及大小。同时测量内膜中层厚度(IMT)。（通常以IMT≤1.0mm为正常，1.1 mm≥IMT＞1.0mm为内膜增厚，IMT＞1.1 mm表示斑块形成，根据斑块性质，分为稳定斑块和易损斑块。）胰岛素抵抗评价用胰岛素敏感性指数(IAI)进行表示，即将空腹血糖、空腹胰岛素乘积的倒数转变成自然对数。血清APN、SAA、TNF-a、IL-6浓度测定均采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法进行检测。基因组分型采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)。抽取肘静脉血白细胞提取基因组DNA，PCR-RFLP多态性的分析方法分析SAA1基因多态性。统计学处理采用SPSS17.0统计软件，计量资料检验应用t检验，计数资料的检验应用X2检验。Hardy-Weinberg均衡（H-W平衡）应用拟和优度X2检验，采用Logistic回归分析计算OR和95％可信区间，采用单因素方差分析进行各组间同一项检验指标的组间比较，采用LSD检验进行多重比较，采用Pearson相关分析进行相关性分析。P＜0.05为有统计学意义。　　研究结果:SAA1基因rs12218 CC基因型在观察组中为9.67％，明显高于对照组3.33％，差异有统计学意义，C等位基因频率在实验组中为0.297，明显高于对照组0.226，差异有统计学意义。与TT基因型相比，CC基因型及C等位基因频率患动脉粥样硬化血栓形成性脑梗死几率明显增加，且差异有统计学意义。校正各种混杂因子的影响，两组间的差异仍有统计学意义。观察组中各基因型亚组IMT、SAA、TNF-a、IL-6水平与对照组比较均升高，IAI水平与对照组比较降低，差异均有统计学意义; CC、CT基因型较TT基因型IMT、SAA、TNF-a、IL-6水平均显著增高，IAI水平显著降低。采用Pearson相关分析，SAA与IMT、TNF-α和IL-6水平显著正相关。SAA与IAI水平显著负相关。　　研究结论:　　1.SAA1基因rs12218变异和中国汉族人动脉粥样硬化血栓形成性脑梗死的发病有关。rs12218CC基因型和C等位基因频率可以增加动脉粥样硬化血栓形成性脑梗死的风险。　　2.SAA1基因rs12218CC基因型患者可能通过显著升高血清SAA水平，从而上调血清中TNF-a和IL-6这些炎性因子的表达，促使颈动脉炎症水平加重，颈动脉IMT增加，最终促使颈动脉粥样硬化斑块的形成，增加动脉粥样硬化血栓形成性的发生。　　3.ADIPOR2基因的rs12342变异和SAA1基因的rs12218变异可能在颈动脉粥样硬化及血管炎症的发生发展过程中联合作用，导致动脉粥样硬化血栓形成性脑梗死的发生。