论文部分内容阅读
创伤弧菌是一种革兰氏阴性人畜共患致病菌，脂蛋白是其重要的毒力因子,是细胞膜合成、信号转导、细菌黏附、抗生素抗性、物质转运中的关键蛋白质。脂蛋白的生理功能的发挥依赖于其正确的蛋白结构和细胞定位,因此研究创伤弧菌脂蛋白转运信号具有重要意义。已知大肠杆菌、铜绿假单胞菌、布鲁氏菌脂蛋白通过Lol转运系统来进行细胞膜定位。创伤弧菌有与大肠杆菌脂蛋白转运系统Lol系统组分基因序列相似度较高的同源基因lolABCDE，本论文以创伤弧菌基因组为模板扩增与大肠杆菌同源性较高的基因lolA-E，并在大肠杆菌中成功表达或重组表达;利用分离周质空间成分的方法、OMV外膜小体方法、蛋白水相脂相分离的方法确定了LolA蛋白为定位于周质空间，LolB、LolC蛋白为定位于细胞膜外膜的脂蛋白；利用球状体释放的方法验证了LolA释放脂蛋白的功能；利用点突变技术获得了LolAF63E功能突变体，但是蛋白突变体的表达并没有抑制创伤弧菌的生长；利用共纯化LolD-His taq蛋白策略，验证了LolD与LolC、LolE之间的相互作用；利用点突变技术获得了蛋白突变LolDG41D功能突变体蛋白，通过生长曲线确定了功能突变对细菌的生长抑制表型；通过SDS敏感性实验验证了LolDG41D蛋白可能与细胞膜的形成有关。总之，创伤弧菌的同源基因负责了脂蛋白转运系统成分的部分功能。