miR-192-3p靶向CCNDBP1促进卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭

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背景卵巢癌是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一,不仅发病率高,死亡率更高,在各类妇科肿瘤中居于首位。因起病隐匿,病因不明,可靠的筛查手段缺乏,所以早期诊断比较困难,而确诊时已是晚期,对女性的身体健康构成严重威胁。miRNA也称micro RNA,长度为21-23个核苷酸分子,广泛存在于真核生物中,通过与m RNA 3’端非翻译区的特异性结合,抑制m RNA的转录,在物质代谢、细胞增殖、细胞分化以及凋亡等一系列生命活动中扮演了重要角色。我们采用miRNA表达谱芯片筛选出过表达VPS33B后有差异表达的miRNA,通过验证和筛选,选取miR-192-3p作为本课题的研究对象。目的1.明确miR-192-3p在卵巢癌细胞中的作用2.探讨miR-192-3p在卵巢癌细胞中发挥作用的机制3.探讨miR-192-3p在卵巢癌细胞中的靶标及其调控机制4.探讨miR-192-3p在VPS33B过表达卵巢癌细胞中的作用方法1.明确miR-192-3p在卵巢癌细胞中的作用(1)转染miR-192-3p mimics检测对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响;(2)转染miR-192-3p inhibitors进行功能回复实验。2.探讨miR-192-3p在卵巢癌细胞中发挥作用的机制:Western Blot检测增殖及EMT相关蛋白的表达。3.探讨miR-192-3p在卵巢癌细胞中的靶标及其调控机制(1)利用生物信息学软件预测miR-192-3p的靶基因并进行双荧光素酶报告验证;(2)细胞水平功能实验检测靶基因在卵巢癌细胞中的作用;(3)细胞水平功能实验检测卵巢癌细胞中靶基因对miR-192-3p的影响;4.探讨miR-192-3p在VPS33B过表达卵巢癌细胞中的作用:瞬时转miR-192-3p mimics和VPS33B质粒后,细胞水平功能检测miR-192-3p在过表达VPS33B卵巢癌细胞中的作用。结果1.miR-192-3p促进卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭;2.miR-192-3p促进卵巢癌细胞中增殖及部分EMT相关蛋白的表达;3.miR-192-3p通过靶向CCNDBP1促进卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭;4.miR-192-3p参与了VPS33B在卵巢癌细胞中的部分作用。结论miR-192-3p在卵巢癌细胞中发挥促癌作用,可能通过靶向CCNDBP1来促进卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭。
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