【摘 要】
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研究目的:研究重组腺相关病毒(rAAV)介导胰岛素样生长因子-1(IGF-1)载体感染体外神经元后表达IGF-1的情况,并研究该病毒载体对高糖诱导神经元凋亡的保护作用。为今后应用该病
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研究目的:研究重组腺相关病毒(rAAV)介导胰岛素样生长因子-1(IGF-1)载体感染体外神经元后表达IGF-1的情况,并研究该病毒载体对高糖诱导神经元凋亡的保护作用。为今后应用该病毒载体体内治疗糖尿病性膀胱提供实验依据。研究方法:利用分子克隆技术将大鼠IGF-1基因克隆到pSNAV2.0质粒上,构建包含pSNAV2.0-IGF-1质粒的杂合型重组腺相关病毒(rAAV2/1-IGF-1)。使用该病毒载体感染人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y神经元)后,对SH-SY5Y神经元进行高糖培养基诱导凋亡,应用RT-PCR和WESTERN BLOT研究IGF-1基因的表达情况,并研究rAAV2/1-IGF-1感染后对高糖诱导神经元凋亡的保护作用。结果:成功构建rAAV2/1-IGF-1并感染SH-SY5Y后,RT-PCR显示SH-SY5Y能表达大鼠IGF-1基因,WESTERN BLOT检测发现较对照组其能显著提高蛋白IGF-1的表达水平,并且通过荧光显微镜以及流式细胞仪检测结果提示该病毒载体能明显降低高糖诱导细胞凋亡的凋亡率。结论:rAAV2/1-IGF-1感染体外神经元能显著表达IGF-1蛋白,并有效地保护高糖对神经元的诱导凋亡作用。
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