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目的 观察FK506对分离提纯的小鼠胰岛胰岛素释放及活性的影响。 方法 取18—20克的BLAB/C雄性小鼠，断颈处死。剖腹，暴露胆总管，于其远端进入十二指肠处结扎。从近端顺行置管，向胰管缓慢输注4℃PH7.4内含2mg/ml胶原酶IV（CollagenaseIV）的Hanks-HEPES液1.5ml，直至整个胰腺组织膨胀。迅速完整摘取胰腺组织。置37℃水浴，消化30-40min后，用4℃Hanks液终止消化，过滤。4℃Hanks液离心清洗2次，以25％、23％、20％、11％Ficoll进行不连续密度梯度离心。在11％与20％、20％与23％层面提取胰岛细胞，经4℃Hanks液离心清洗2次，置入RPMI1640培养液（含10％小牛血清，100IU/ml青、链霉素），混匀，均分于24孔细胞培养板，计数，于37℃、5％C02孵箱培养过夜。本次实验共分三组：第一组 培养过夜的胰岛细胞，加入FK506，分别以100ng/ml、1000ng/ml、10000ng/ml的浓度与空白对照组，一起孵育24小时。每孔各加2.8mM葡萄糖（2.5ul1.67M葡萄糖）。低糖刺激2小时后检测胰岛素释放浓度。第2组 2001年浙江大学硕士学位申请论文 培养过夜的胰岛细胞，分别加入 10000 nglml FK506 与 100、1000 与 10000 ng／ml 环抱素在上述浓度下，与空白对照组 相比。倒置镜下计数存活胰岛，比较加药前后2 次存活数，计算成 活率。第3 组 培养过夜的胰岛细胞，分别加入FK506（10000 ng／。l）与浓度 1000 ng／ml，10000 ng／ml环抱素，与空白组一 起培养24小时。培养板2提取其上清液lml，测定胰岛素的浓度。 将培养板 1 的胰岛细胞收集起来，经叮睫橙（Acridin orange，AO）一 滨乙锭（Ethidum bromideEB）染色，在荧光显 微镜下，统计其活性（Viability） 结果 实验组 l 在一定的浓度（100ng／ml、1000ng／ml、 10000ng／ml）范围中，随着FK506 浓度的升高，在体外对小鼠胰’岛细胞的胰岛素释放有促进作用。实验组2、3，在FK506组中， 胰岛细胞活性、成活率，明显高于环抱素组。在培养板2 的过夜的 培养液中FK506 组较CSA 组对小鼠胰岛细胞的胰岛素释放有促进 作用。与FK506 组相比，环抱素对小鼠胰岛细胞的胰岛素释放有 抑制作用。至今，在体外，关于高浓度的FK506对分离纯化的小鼠 胰岛细胞在低糖刺激下胰岛素释放功能与活性的影响，在文献中未 见有类似的报道。 结论 高浓度FK506 短期作用下，在体外对分离提纯的小鼠胰 岛细胞的胰岛素释放有促进作用。增加了胰岛的成活率，提高了胰 岛细胞的活性。