柘树Cudraniatricuspidata(cam)Bur．为桑科(Moraceae)柘属植物，其根入药具有祛风除湿、活血通经、健脾益胃及消炎止痛等功效，临床用于治疗风湿关节痛、跌打损伤、脾虚泄泻及黄疸等症，近年来又用于治疗胃癌等消化系统肿瘤。国内研究发现柘树黄酮粗提物具有抗肿瘤活性，但活性成分未知。本课题组前期研究表明，多数异戊烯基。山酮对HCT-116，SMMC-7721，SGC-7901和BGC-8234种人消化系统肿瘤细胞株显示显著的细胞毒活性，初步的SGC-7901裸鼠移植实验也表明总黄酮部位具有显著抑制活性。因此，本论文在原有工作基础之上，重点对柘树总黄酮的制备工艺和含量测定方法进行研究，从而为将柘树总黄酮开发为抗消化系统肿瘤的中药五类新药奠定基础。 1．化学对照品的分离纯化 经过反复的正反相柱层析，对4种化学对照品柘树口山酮乙(cudratricusxanthoneB)、macluraxanthoneB、柘树口山酮己(cudratricusxanthoneF)和柘树口山酮丁(cudratricusxanthoneD)进行分离纯化，经HPLC-DAD-ELSD测得其纯度均大于98％，达到含量测定用对照品的要求。 2．比色法测定柘树中总黄酮的含量 以macluraxanthoneB为对照品，采用比色法测定柘树根中总黄酮的含量。样品的前处理采用95％乙醇超声提取后，大孔树脂纯化的方法。结果显示，macluraxanthoneB在57．00～285．00μg范围内呈良好线性关系，回归方程为y=0．0047x+0．0303，r=0．9999，平均加样回收率为99．90％，RSD为2．34％(n=6)。目前以异戊烯基口山酮为对照品测定柘树中总黄酮含量的方法未见报道。本文系首次以柘树中含量较高且活性好的macluraxanthoneB为对照品，建立了柘树中总黄酮的含量测定方法。 3．高效液相色谱法测定柘树中4种异戊烯基。山酮的含量 采用HyperCloneBDSCts(4．6mm×250mm，5μm)色谱柱，以甲醇．乙腈·O．2％磷酸为流动相，梯度洗脱，流速0．8mL／min，检测波长259nm，柱温50~C。结果显示，4种异戊烯基山酮在…定范围内均呈良好线性关系，平均加样回收率在97．03％～103．25％范围内，RSD<3．86％(n=6)。关于异戊烯基口山酮的含量测定方法未见报道，本文系首次建立了柘树根中4种异戊烯基。山酮的含量测定万法。 4．柘树总黄酮的制备工艺 采用正交设计法优选出柘树总黄酮的初提工艺，即采用渗漉法，以5倍量95％乙醇浸泡12h，收集lO倍量渗漉液。从静态吸附实验中优选出大孔树脂的型号为DiaionHP-20。通过对吸附和解吸条件的考察，确定了以下提纯工艺条件：上样溶液浓度为0．2g／mL，30％乙醇溶解，将溶液以4BWh的流速通过HP-20树脂柱进行吸附，然后用50％乙醇以4BVgn的流速洗脱5BV淋洗杂质，再用90％乙醇以4BVgn的流速洗脱5BV。将90％乙醇洗脱液浓缩至干即为总黄酮提取物，其中总黄酮纯度约60％。本文系首次对柘树总黄酮的制备工艺进行系统研究，确定的工艺路线简洁、成本低，适用于工业化生产。 最后本文对黄酮类化合物的定量分析方法进行了综述。