【摘 要】
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将H5N1亚型禽流感病毒NS1基因插入到杆状病毒转移载体pFastBac1中,获得重组转移载体pFastBac1-NS1.将pFastBac1-NS1转化到DH10Bac感受态细胞中,筛选到重组转座子rBacmid-NS1.
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001
【出 处】
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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会
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将H5N1亚型禽流感病毒NS1基因插入到杆状病毒转移载体pFastBac1中,获得重组转移载体pFastBac1-NS1.将pFastBac1-NS1转化到DH10Bac感受态细胞中,筛选到重组转座子rBacmid-NS1.在脂质体转染试剂介导下将rBacmid-NS1转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒rBV-NS1.rBV-NS1感染Sf9细胞后,通过SDS-PAGE、Westernblot和ELISA分析表明:获得了分子量26ku的NS1蛋白;并且该蛋白可与H5N1亚型高致病性禽流感感染鸭血清发生特异反应,而不能与H5N1亚型灭活疫苗免疫鸭的血清发生反应.试验结果表明:NS1在Sf9昆虫细胞中获得了高效表达,具有与病毒蛋白相似的免疫活性,重组NS1蛋白可以作为区分免疫及自然感染动物的鉴别诊断抗原.NS1蛋白的成功表达为禽流感病毒自然感染家禽与禽流感灭活苗免疫家禽的鉴别诊断奠定了基础。
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