【摘 要】
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目的 构建大鼠Pax-8基因全长序列的真核表达载体pcDNA3.1,并将重组质粒转染至心肌细胞系H9C2中进行表达,测定转染后Pax-8基因对心肌细胞增殖及凋亡的影响.方法 酶切pCMV
【机 构】
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温州医学院附属第一医院心内科 温州医学院心血管生物和基因研究所
【出 处】
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第五届钱江国际心血管病会议暨2011浙江省心血管病年会
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目的 构建大鼠Pax-8基因全长序列的真核表达载体pcDNA3.1,并将重组质粒转染至心肌细胞系H9C2中进行表达,测定转染后Pax-8基因对心肌细胞增殖及凋亡的影响.方法 酶切pCMV sport6_Pax-8获得大鼠Pax-8全长基因,通过基因重组技术将其插入到真核表达载体pcDNA3.1中,构建重组质粒pcDNA3.1_Pax-8.限制性酶切鉴定和DNA测序鉴定插入片段.将重组质粒经脂质体法转染至大鼠心肌细胞系H9C2细胞中,RT-PCR法及Western blot法分别检测转染后Pax-8 mRNA及蛋白表达水平.CCK8法检测细胞增殖,Western blot法检测Caspase3的表达.结果 成功构建了大鼠pcDNA3.1_Pax-8真核表达载体,且证实转染后心肌细胞的Pax-8基因mRNA及蛋白表达均明显高于空白对照组(P＜0.05)及空质粒组(P＜0.05).转染重组质粒后心肌细胞增殖力明显高于转染空质粒组(P＜0.01),而Caspase3的表达则较低(P＜0.05).结论 通过基因重组技术成功使得Pax-8基因在心肌细胞中过表达.Pax-8可能通过促进心肌细胞的增殖及保护心肌细胞的凋亡参与胚胎心脏发育的过程.
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