目的：运用单克隆抗体技术制备抗人TLR4单克隆抗体，并鉴定其生物学活性。方法：以rhTLR4作为抗原，按照10μg/只/次进行免疫。将10μgrhTLR4和佐剂混合至总体积为0.5ml，经超声充分乳化后，腹腔注射免疫小鼠，共3次。取血测定小鼠mhTLR4抗体效价及其阻断LPS诱导的人PBMC表达TNF—a的影响。分离小鼠脾脏B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合并培养，挑选阳性杂交瘤细胞，扩大培养，收集细胞上清，采用HiTrapprotein G亲和柱纯化单抗并进行超滤浓缩，鉴定单抗阻断内毒素效应的生物学效应。结果经3次免疫后的小鼠血清中抗rhTLR4抗体的效价具有较高水平的表达，当小鼠血清稀释度达1：128000以上时，血清仍可有效地检测到rhTLR4。LPS诱导阻断试验结果表明，1：500的小鼠免疫血清几乎完全抑制体外培养的人PBMC的TNF—a的表达，并随着血清浓度的稀释，其抑制作用逐渐下降。当血清稀释到1：4000时，抑制作用才消失。分离小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合，采用常规的间接ELISA法检测10块培养板中的阳性克隆，获得3株阳性单克隆杂交瘤细胞。其中2株细胞经过扩大增殖培养，并经纯化浓缩制备出较高产量的鼠抗人TLR4单克隆抗体。生物学活性测定表明，2株杂交瘤细胞产生的抗rhTLR4单克隆抗体，能够明显地阻断LPS诱导的人PBMC细胞对TNF—a的表达。结论：本文在国内首次应用重组人TLR4蛋白为抗原，成功制备出鼠抗人TLR4单克隆抗体，经鉴定具有较高的阻断内毒素信号传导的效应。为进一步研制人源化抗TLR4抗体、研制新一代抗内毒素靶向药物，治疗肝病的内毒素血症、控制重型肝炎的病情进展、抗革兰氏阴性菌感染性休克奠定了基础。