【摘 要】
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采用自行设计的引物,通过PCR的方法,分别从pMD-HA5和pMD-HA9中成功扩增出AIVA/Chicken/Guangdong/25/2000(H5N1)株和A/Chicken/Guangxi/KMⅢ/1999(H9N2)株的HA基因,然后分别
【机 构】
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华南农业大学兽医学院,广州,510642
【出 处】
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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会
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采用自行设计的引物,通过PCR的方法,分别从pMD-HA5和pMD-HA9中成功扩增出AIVA/Chicken/Guangdong/25/2000(H5N1)株和A/Chicken/Guangxi/KMⅢ/1999(H9N2)株的HA基因,然后分别亚克隆到pET-32a(+)、pET-28a(+)表达载体中,构建并筛选出阳性重组子,分别标记为pET32-HA5、pET28-HA9.将阳性重组质粒转化进BL21(DE3)宿主菌中,通过改变IPTG浓度和诱导时间,使重组蛋白获得表达,并确定了最佳诱导条件为IPTG终浓度1.0mM、诱导时间4～5 h.经SDS-PAGE和Western-blotting分析表明重组蛋白相对分子量约为85KDa和63KDa,主要存在于包涵体中,具有良好的免疫学活性.
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