【摘 要】
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经反转录聚合酶链式反应(Revers-TranscriptionPolymeraseChainReaction,RT-PCR)扩增了SARS冠状病毒(SARS-CoV)BJ01株的PU5基因(putativeuncharacterizedgene5)的cDNA,将其克
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,黑龙江,哈尔滨,150001
【出 处】
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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会
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经反转录聚合酶链式反应(Revers-TranscriptionPolymeraseChainReaction,RT-PCR)扩增了SARS冠状病毒(SARS-CoV)BJ01株的PU5基因(putativeuncharacterizedgene5)的cDNA,将其克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,命名为pGEX-PU5,测序正确后将阳性质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,表达的融合蛋白命名为pGEX-PUP5,并用GlutathioneSwpharoseTM4B亲和层析柱对表达产物进行纯化,然后用PreScissionTMProtease酶对融合蛋白进行解离,获得PUP5蛋白,用抗SARS-CoV卵黄抗体IgY和GST-tag单克隆抗体分别对表达的目的蛋白做Westernblot鉴定,证明所表达的蛋白具有免疫学活性.本研究应用原核表达系统表达了PUP5蛋白,为进一步解析该蛋白功能奠定了基础。
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