【摘 要】
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目的：考察毛蚶抗癌活性蛋白(Arca subcrenata Lischke anticancer protein,ASAP)体外对人慢性粒细胞性白血病K562细胞的抑制作用,初步探讨其作用机制.方法：倒置相差显微镜下观察ASAP作用后K562细胞形态学变化;Giemsa染色观察细胞及核的变化;MTT法考察ASAP对K562细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡及周期变化情况;Western b
【机 构】
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北京中医药大学中药学院,北京100102 中国海洋大学海洋生命科学学院,山东,青岛 266003
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目的：考察毛蚶抗癌活性蛋白(Arca subcrenata Lischke anticancer protein,ASAP)体外对人慢性粒细胞性白血病K562细胞的抑制作用,初步探讨其作用机制.
方法：倒置相差显微镜下观察ASAP作用后K562细胞形态学变化;Giemsa染色观察细胞及核的变化;MTT法考察ASAP对K562细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡及周期变化情况;Western blotting考察凋亡相关蛋白caspase-3的表达情况.
结果：MTT显示,在0-48h,ASAP对K562细胞具有明显的抑制作用,呈时间和剂量依赖性,24h和48h的浓度-效应相关系数分别为0.968(P=1.88E-5)和0.750(P=0.020);镜下观察,浓度为200μg·mL-1的ASAP作用于K562细胞48h,ASAP处理组K562细胞出现变形、多个核或核碎裂等形态学变化;流式细胞术结合Giemsa染色显示,ASAP可引起K562细胞G2-M期阻滞、多核细胞增多及凋亡,随着ASAP浓度的增加,细胞凋亡率明显增加,200μg?mL-1ASAP处理48h组K562细胞凋亡率为早期(32.75±0.07)％以及晚期(31.25±2.19)％vs对照组的早期(3.7±1.13)％以及晚期(9.9±0.85)％;Western blotting结果显示,ASAP作用32h后,凋亡蛋白caspase-3表达水平出现明显的上调.
结论：ASAP主要通过诱导K562细胞G2-M期阻滞及caspase-3通路依赖的细胞凋亡抑制其生长.
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