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目的：以睾酮为探针药物采用高效液相色谱法测定CYP450 3A4的活性。方法：采用大鼠肝微粒体体外代谢模型，以有机溶剂乙腈终止反应并沉淀蛋白，上清液进高效液相色谱分析，根据Lineweaver-Burk(双倒数作图法)方程式计算酶动力学参数。结果：在酶浓度为1.0mg·mL-1，反应时间为5min时酶促反应近似直线进行，测得酶动力学参数Km值为38.84μmol·L-1，Vmax值为1.83μmol·L-1·mgin-1·mg-1protein。结论：本方法简便、有效，适合实验室用于测定CYP450 3A4的活性，为进一步研究药物相互作用奠定了基础。