【摘 要】
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目的：Apelin 作为APJ 的内源性配体,apelin/APJ 系统在心脑血管疾病中起着重要的作用.本课题组前期报道apelin-13 可通过PI3K-Akt、ERK1/2、14-3-3、NOX4\ROS、Notch3 途径促血管平滑肌细胞增殖,参与动脉粥样硬化的形成.文献报道细胞迁移也可参与动脉粥样硬化形成,本课题旨在探讨apelin-13 对人主动脉血管平滑肌细胞迁移的作用,深入讨论NCS
【出 处】
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2017年中国药学大会暨第十七届中国药师周
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目的：Apelin 作为APJ 的内源性配体,apelin/APJ 系统在心脑血管疾病中起着重要的作用.本课题组前期报道apelin-13 可通过PI3K-Akt、ERK1/2、14-3-3、NOX4\ROS、Notch3 途径促血管平滑肌细胞增殖,参与动脉粥样硬化的形成.文献报道细胞迁移也可参与动脉粥样硬化形成,本课题旨在探讨apelin-13 对人主动脉血管平滑肌细胞迁移的作用,深入讨论NCS1 诱导高尔基体应激介导apelin-13 促人主动脉血管平滑肌细胞迁移新的分子机制,发现新的潜在的用于治疗高血压等血管增生性疾病及动脉粥样硬化疾病的新的作用机制及作用靶点.方法：1.Western Blot 检测人主动脉血管平滑肌细胞NCS1,GOLPH3 表达；2.Wound healing 检测人主动脉血管平滑肌细胞迁移；3.Transwell 迁移检测apelin-13 对HA-VSMCs 迁移的影响；4.透射电子显微镜观察HA-VSMCs 中高尔基体形态；5.免疫荧光观察GOLPH3 在亚细胞定位情况；6.RNA 干扰技术分别干扰HA-VSMCs 中NCS1、GOLPH3 的表达；7.免疫组化法分别检测apelin、APJ、NCS1 及GOLPH3 蛋白在双肾双夹高血压大鼠主动脉血管平滑肌组织中和人尸检冠状动脉粥样硬化的血管平滑肌组织中的表达.结果：1.划痕实验和transwell 迁移实验显示apelin-13 浓度(0-1μmol/L)依赖性促人血管平滑肌细胞迁移；2.Apelin-13 浓度(0-1μmol/L)和时间(0-24h)依赖性促进高尔基体应激标志物GOLPH3 的表达；3.APJ 阻断剂F13A 抑制apelin-13 诱导的GOLPH3 的表达；4.Apelin-13 使GOLPH3 的亚细胞定位发生改变,从细胞核周围聚集向胞浆中扩散；5.透射电子显微镜观察发现apelin-13 诱导高尔基体结构碎裂；6.Apelin-13 浓度(0-1μmol/L)和时间(0-24h)依赖性促NCS1 的表达；7.APJ 抑制剂F13A 抑制apelin-13 诱导的人血管平滑肌细胞中NCS1 的表达；8.RNA 干扰沉默NCS1 能够抑制apelin-13 诱导的人血管平滑肌细胞中高尔基体应激标志物GOLPH3 的表达；9.RNA干扰沉默NCS1 抑制apelin-13 诱导的高尔基体结构的碎裂；10.RNA 分别干扰沉默NCS1 或者GOLPH3 均能抑制apelin-13 促人血管平滑肌细胞的迁移作用；11.Apelin、APJ、NCS1 及GOLPH3 在尸检动脉粥样硬化冠状动脉人的血管平滑肌组织的表达呈阳性,明显高于在尸检正常人的冠状动脉血管平滑肌组织中的表达；双肾双夹高血压大鼠主动脉血管平滑肌组织中apelin、APJ 及GOLPH3 的表达明显增加,并且其血管壁发生明显的增生及增厚.结论：NCS1诱导高尔基体应激介导apelin-13 促人主动脉血管平滑肌细胞迁移.
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