【摘 要】
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目的：应用RNA干扰技术构建一个载体,同时编码Bcl-2和Survivin基因的短发夹RNA(shRNA),观察其对宫颈癌Hela细胞生长增殖及顺铂化疗敏感性的影响.方法：分别构建靶向Bcl-2和Survivin基因的pGenesil1.2-Bcl-2和pGenesil1.1-Survivin shRNA表达质粒,经亚克隆构建同时靶向双基因的重组表达质粒pGenesil1.1+2-(Bcl-2+S
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目的：应用RNA干扰技术构建一个载体,同时编码Bcl-2和Survivin基因的短发夹RNA(shRNA),观察其对宫颈癌Hela细胞生长增殖及顺铂化疗敏感性的影响.
方法：分别构建靶向Bcl-2和Survivin基因的pGenesil1.2-Bcl-2和pGenesil1.1-Survivin shRNA表达质粒,经亚克隆构建同时靶向双基因的重组表达质粒pGenesil1.1+2-(Bcl-2+Survivin)并鉴定分析.各质粒分别转染入宫颈癌Hela细胞,经G418筛选获得稳定转染的宫颈癌细胞株.逆转录-聚合酶连反应(RT-PCR)技术Western-blot法检测目的基因Bcl-2和Survivin mRNA和蛋白的表达,Hoechst染色观察各组细胞形态学特征,四甲基偶氮唑盐(MTT)法评估肿瘤细胞增殖能力以及对顺铂化疗药物的敏感性.
结果：成功构建短发卡RNA(shRNA)质粒表达载体,经G418筛选获得各重组质粒稳定转染的Hela细胞株.与对照组相比,单双基因干扰组Bcl-2和(或)Survivin mRNA及蛋白均明显降低(P＜0.05,P＜0.01),且pGenesil1.1+2-(Bcl-2+Survivin)组同种mRNA和蛋白表达水平低于单基因干扰组(P＜0.05).细胞形态学显示各干扰组细胞均出现凋亡,其中pGenesil1.1+2-(Bcl-2+Survivin)组凋亡率达17.95％.MTT结果显示pGenesil1.1+2-(Bcl-2+Survivin)组较单个基因干扰组更明显抑制Hela细胞生长(P＜0.05),显著提高了Hela细胞对顺铂化疗药物的敏感性(P＜0.05).
结论：同时干扰Bcl-2和Survivin双基因较单基因能有效抑制宫颈癌细胞增殖、诱导凋亡和提高化疗药物的敏感性,为宫颈癌基因治疗奠定了良好的实验基础.
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