【摘 要】
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为建立一种特异、灵敏检测猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的巢式RT-PCR(Nested RT-PCR)方法,本研究参照GenBank中CSFV E2基因序列保守片段,设计两对引物,经优化
【机 构】
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河南省动物疫病预防与控制中心,河南郑州,450008
【出 处】
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河南省畜牧兽医学会暨饲料饲草学分会2015年度学术交流会
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为建立一种特异、灵敏检测猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的巢式RT-PCR(Nested RT-PCR)方法,本研究参照GenBank中CSFV E2基因序列保守片段,设计两对引物,经优化反应条件,建立CSFV Nested RT-PCR方法,对其进行特异性、敏感性和重复性试验;利用所建立的检测方法对35份临床疑似CSFV感染样品进行了应用检测,并对检测阳性PCR产物进行克隆测序鉴定.结果表明,本研究成功建立了CSFV Nested RT-PCR检测方法,该方法可特异地扩增CSFV,但ST细胞和其他8种病原对照未扩增出任何条带;稳定性和重复性好;敏感性高,最低检测病毒含量为1TCID50;自35份疑似CSFV感染样品中检出18份阳性样品,检测结果与PCR阳性产物克隆测序结果完全一致.本研究成功建立了CSFV Nested RT-PCR方法,可用于CSFV的快速检测,为CSF的早期检测诊断提供了特异、灵敏的方法.
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