【摘 要】
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抗菌肽是广泛存在于生物体内能够抵御外界微生物侵害的小分子肽,是宿主免疫防御系统的重要组成部分.由于抗菌肽具有高效,环保,不易产生耐药性等优点,近年来已成为植物抗
【机 构】
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湖北大学生命科学学院中国农业科学院油料作物研究所
【出 处】
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第十四届微生物学教学和科研及成果产业化研讨会
论文部分内容阅读
抗菌肽是广泛存在于生物体内能够抵御外界微生物侵害的小分子肽,是宿主免疫防御系统的重要组成部分.由于抗菌肽具有高效,环保,不易产生耐药性等优点,近年来已成为植物抗病基因工程的研究热点.本研究利用油菜EST数据库中的序列信息及油菜、白菜和廿蓝全基因组测序结果,通过生物信息学的手段在全基因组范围内进行油菜抗菌肽基因的预测和分析.我们已经初步获得了油菜中近1000条与已知抗菌肽有类似序列结构特征的候选基因,并从中筛选了40个属于不同基因家族的抗菌肽基因用于人工合成及活性检测.这40个基因平均长度为135bp,编码44个氨基酸,我们通过Overlap PCR方法已完成40个抗菌肽基因的人工合成.本研究中我们采用猪瘟病毒定点突变外壳蛋白(EDDIE)作为融合蛋白,构建了一个能高效准确表达抗菌肽基因的2体pET30a-EDDIE-GFP.将人工合成的抗菌肽基因克隆到该表达载体上,通过在大肠杆菌中表达,得到的包涵体融合蛋白,并通过在体外复性,融合蛋白EDDIE的自我剪切,从而获得不含有任何冗余氨基酸的抗菌肽产物.以大肠杆菌、藤黄八叠球菌为革兰氏阴性菌和阳性菌的标准菌株,检测抗菌肽对细菌的抑菌活性.目前得到了28个对革兰氏阳性菌,革兰氏阴性菌及真菌有明显的抑菌作用的油菜抗菌肽基因.本研究在全基因组水平上系统高通量挖掘抗菌肽基因,批量筛选获得具有高抑菌活性的抗菌肽基因,为植物抗病性遗传改良提供基因源和理论指导.
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