【摘 要】
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目的:制备抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体,鉴定其免疫学特性并建立分析检测体系.
方法:利用PCR技术将鸭RIG-Ⅰ基因helicase区和RD区部分编码序列分别进行扩增,并分别命名为c、d段;
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所150001
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目的:制备抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体,鉴定其免疫学特性并建立分析检测体系.
方法:利用PCR技术将鸭RIG-Ⅰ基因helicase区和RD区部分编码序列分别进行扩增,并分别命名为c、d段;克隆到pET30a原核表达载体,构建了重组原核表达质粒pET30a-c和pET30a-d;通过转化BL21(DE3)感受态菌、IPTG诱导、镍柱纯化表达蛋白;将纯化的c、d蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体(mAb);采用ELISA、Western blot和IFA对单克隆抗体进行鉴定分析.
结果:获得鼠抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体15株,14株与原核分段表达的c、d蛋白有良好的反应性,3株与真核表达的RIG-Ⅰ蛋白有良好的反应性.
结论:制备的鼠抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体为RIG-Ⅰ在抗病毒天然免疫信号转导途径的研究奠定了基础.
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