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通过构建结核分枝杆菌蛋白TB16.3的原核表达载体并表达纯化,对其检测抗体的性能进行评价。用PcR法从结核菌H37Rv基因组DNA扩增TB16.3基因,连接到表达载体PET-30a上,在大肠杆菌中表达;组氨酸标签镍柱层析纯化重组蛋白;建立ELISA方法检测116份TB患者和96份健康对照者血清中的抗结核菌TB16.3抗体。构建了表达TB16.3的大肠杆菌工程菌,发现目的蛋白主要以可溶形式存在。诱导NIPTG浓度为lmmol/L,37℃培养5h可获得最大量表达。而在28℃时重组蛋白为可溶形式表达。用重组TB16.3蛋白,ELISA方法检测118份TB患者和96份健康者血清,敏感性、特异性和调整一致率分别为72.9%、86.5%和179.6%。抗TB15.3抗体的敏感性、特异性和调整一致率分别为46.6%、99.0%和76.0%。抗CFP-10的敏感性、特异性和调整一致率分别为75.4%、55.2%和65.7%。结核病患者抗Rv2626C抗体阳性率(44.1%)显著低予其在正常对照的阳性率(75.0%,X~2=20.8,p<0.01),TB15.3和TB16.3等量包被检测,敏感性、特异性和一致率分别达69.4%、96.9%和83.7%,检测非TB肺部疾病患者,其抗体阳性率仅为9.6%,特异性为90.4%。TB15.3和TB16.3混合后同时包被检测,结合TB15.3单独检测的结果,则敏感性、特异性和一致率分别达82.2%、95.9%和88.9%,一致率为最高。上述结果表明目的基因克隆入宿主菌中并表达成功,获得制备上述4种蛋白的最适条件。获得的重组TB16-3、CFP-10和ITBl5.3蛋白可能成为结核病血清学诊断的抗原或者抗原组合。Rv2626C抗体可能被用于结核患者恢复期的评估。