【摘 要】
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目的:探讨不同浓度脂多糖作用不同时间对体外培养的人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMC)生长的影响,摸索其应用于HCASMC实验研究的无毒性浓度范围,为开展介入术后再狭窄相关研究建立HCASMC炎症活化模型提供实验数据支持.方法:用体外培养的HCASMC3-5代,加入96孔细胞培养板,用噻唑蓝比色实验(MTT法)检测不同浓度(0,0.01,0.1,0.5,1,5,10,100μg/ml)脂多糖在不同作
【机 构】
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北京中医药大学东直门医院;北京中医药大学心血管病研究所
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目的:探讨不同浓度脂多糖作用不同时间对体外培养的人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMC)生长的影响,摸索其应用于HCASMC实验研究的无毒性浓度范围,为开展介入术后再狭窄相关研究建立HCASMC炎症活化模型提供实验数据支持.
方法:用体外培养的HCASMC3-5代,加入96孔细胞培养板,用噻唑蓝比色实验(MTT法)检测不同浓度(0,0.01,0.1,0.5,1,5,10,100μg/ml)脂多糖在不同作用时间(24,46,72h)下HCASMC的活力变化,明确脂多糖对体外培养的HCASMC存活率的影响并总结其与脂多糖浓度和作用时间的对应关系,最终找出脂多糖用于HCASMC炎症实验研究所需的最佳浓度和作用时间.
结果:脂多糖不同浓度和不同作用时间对体外培养的HCASMC细胞活力有着直接影响.纵向比较:脂多糖在低于100μg/ml浓度范围内,干预HCASMC时间短于48h不会出现细胞毒性,多表现为促细胞增殖效应,而干预时间大于48h则显现出较为明显的细胞毒性,且细胞活力随脂多糖浓度的增大而减低;干预72h后脂多糖浓度在0-0.01μg/ml范围内有促增殖作用,0.01-1μg/ml浓度产生轻微的细胞抑制作用,但细胞毒性不明显,在1-100μg/ml浓度下HCASMC毒性反应逐渐出现,且HCASMC活力与此范围浓度呈负相关.横向比较:同一浓度水平的脂多糖随着作用时间延长,HCASMC的细胞活力逐步下降,且作用时间越长下降越明显.
结论:脂多糖在浓度1μg/ml以下不引起细胞毒性,其中0.01μg/ml脂多糖在干预24h条件下可最大程度刺激HCASMC增殖,可作为建立炎症诱导HCASMC活化模型的最佳条件.
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