【摘 要】
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转化生长因子β(Transforming growth factor β,TGF-β)是一族具有多种功能的蛋白超家族,在细胞免疫、细胞增殖分化、组织损伤修复中起着关键性作用.本研究中,通过RT-PC
【机 构】
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上海海洋大学 水产与生命学院,中国 上海 201306
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转化生长因子β(Transforming growth factor β,TGF-β)是一族具有多种功能的蛋白超家族,在细胞免疫、细胞增殖分化、组织损伤修复中起着关键性作用.本研究中,通过RT-PCR法从半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)肝脏中克隆获得TGF-β3基因的ORF区.实时荧光定量PCR分析表明,半滑舌鳎TGF-β3基因在心、肾、肠、肌肉、皮肤、脑、鳃、肝脏、脾脏组织中均有表达,其中在皮中表达量最高,其次为脑和肠,在肌肉中表达量最低.经第一次哈维氏弧菌感染后,TGF-β3基因在免疫相关组织鳃、脾、肾中呈现上调表达趋势,在肝中呈下调表达,其中在鳃中的表达量变化最为显著,感染24h后,相比于对照组上升了4.70倍.7d后将经历过第一次感染的半滑舌鳎再次感染哈维氏弧菌,TGF-β3基因在鳃中的表达量在12h迅速上升至最高值,是对照组的5.77倍和第一次感染12h的1.88倍.此外,本研究将半滑舌鳎TGF-β3基因的ORF区插入表达载体pPIC9K中,电击转入毕赤酵母GS115菌株,经转化子测序验证,成功获得了重组TGF-β3酵母菌.对重组TGF-β3酵母菌进行了诱导表达,蛋白表达产物经SDS-PAGE和Western-blot检测,在53kD处获得一条与预期蛋白分子量大小一致的条带,此蛋白条带能与特异性抗体结合,说明半滑舌鳎TGF-β3在重组酵母中得到正确表达.并且,以上研究暗示TGFβ3基因在半滑舌鳎响应细菌免疫应答中起重要作用.本研究为进一步研究半滑舌鳎TGF-β3基因的功能提供了资料,并为能够高效、简便地生产可以提高半滑舌鳎免疫力和组织损伤修复能力的饲料添加剂奠定了基础.
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