【摘 要】
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目的：寻找一种非动物来源的滋养细胞；用分离的人角膜缘基质微环境细胞共培养人口腔黏膜上皮干细胞,维持口腔黏膜上皮干细胞的未分化状态,用于眼表重建.方法：分散酶分离完整
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属协和医院眼科 430022
【出 处】
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第十二届全国角膜及眼表疾病学术大会暨第四届全国角膜屈光手术大会
论文部分内容阅读
目的：寻找一种非动物来源的滋养细胞；用分离的人角膜缘基质微环境细胞共培养人口腔黏膜上皮干细胞,维持口腔黏膜上皮干细胞的未分化状态,用于眼表重建.方法：分散酶分离完整的口腔黏膜上皮细胞片.在Matrigel包被的培养板上,用胚胎干细胞培养液培养角膜缘基质微环境细胞,并连续传代,取部分第三代的细胞,种到三维Matrigel中,作为滋养细胞.用去上皮的人羊膜作为基底,与滋养细胞共培养人口腔黏膜上皮细胞.同时,用鼠胚来源的3T3滋养细胞、Matrigel包被培养的第四代微环境细胞共培养人口腔黏膜上皮作为对照.用实时定量PCR、 Western blot、免疫荧光染色检测干细胞标志物.上皮细胞增殖能力用克隆形成实验检测.结果：角膜缘基质微环境细胞表达Oct4,Nanog,Sox2等胚胎干细胞标志物.角膜缘基质微环境细胞在Matrigel包被的培养板上迅速扩增,但是扩增后的细胞不再表达胚胎干细胞的标志物.当取第三代的细胞种到三维Matrigel时,这些细胞聚集成簇,增殖减缓,但是重新表达上述胚胎干细胞标志物.口腔黏膜上皮基底细胞表达上皮干细胞的标志物p63、CK15.当用三维方法分离的微环境细胞共培养口腔上皮细胞时,上皮干细胞标志物p63、CK15的表达显著高于3T3滋养细胞组及包被培养组.克隆形成实验证实,三维方法分离的微环境细胞组得到最多的大克隆(Holoclone).结论：角膜缘微环境细胞表达胚胎干细胞标志物是维持口腔黏膜上皮细胞未分化状态的必要条件；这种新分离的微环境细胞可以作为新的滋养细胞培养口腔黏膜上皮片,用于眼表重建.
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