【摘 要】
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糖链定量对于寻找疾病潜在标志物有着重要的意义。随着生物质谱技术的不断发展,基于质谱的糖组学定量技术也得到了相应的发展。同位素标记定量是糖链定量技术中一种重要
【机 构】
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复旦大学生物医学研究院,上海市东安路131号,200032
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糖链定量对于寻找疾病潜在标志物有着重要的意义。随着生物质谱技术的不断发展,基于质谱的糖组学定量技术也得到了相应的发展。同位素标记定量是糖链定量技术中一种重要的方法。已发展了多种同位素标记糖链定量技术。而长期以来,针对糖链的酶促18O标记定量始终没有实现。本研究创造性发展了硼氢化钠辅助的酶促18O双同位素标记定量技术。在该方法中,PNGaseF将N-糖链从蛋白上释放并标记上16O/18O,然后用NaBH4/NaBD4分别还原16O/18O标记的N-糖链,成功实现了16O/18O标记后N-糖链末端H/D标记,发展了N-糖链双同位素标记定量方法。标记后的N-糖链用MALDI-MS进行检测,糖链质量差异为3Da,大大降低了同位素峰重叠对糖链相对定量准确性的干扰,同时使得糖链18O标记更加的稳定。我们还将该双同位素标记定量技术应用于大鼠血清N-糖链定量,成功实现了该方法在复杂生物样本定量糖组学中的应用。此外,我们还利用该技术对正常人血清与肝癌病人血清进行了定量糖组学研究,证明了该技术的有效性和潜在应用价值。
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