Mongersen通过抑制Smad7发挥抗炎作用的体外研究

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目的:探讨Smad7的反义寡核苷酸mongersen的体外抗炎作用。方法:体外细胞模型实验选择RAW264.7巨噬细胞,使用Lipo2000载mongersen转染RAW264.7细胞后加入Pg-LPS处理细胞12h,以模拟牙周炎炎症微环境,采用流式细胞术检测转染效率,为证实Lipo2000作为载体可具有较高的转染效率。为进一步研究mongersen在体外的抗炎作用效果,实验分3组:即空白对照组、阴性对照组、mongersen组,在37℃、5%CO2条件下进行共培养12h后提取细胞总蛋白,Westernblot检测巨噬细胞内Smad7蛋白的表达;相同条件下培养后提取细胞总RNA、逆转录、qRT-PCR检测巨噬细胞分泌的促炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α等在基因水平的表达情况,明确mongersen的体外抗炎作用效果。结果:流式细胞术检测结果提示Lipo2000载mongersen在RAW264.7中具有高转染率,可达76.57%;Western blot结果显示mongersen可明显抑制Smad7蛋白的表达;qRT-PCR结果显示与对照组相比,加入mongersen组的IL-1β、IL-6、TNF-a等促炎因子基因的表达明显下降。提示mongersen可通过抑制促炎因子基因的表达发挥明显抗炎作用。结论:初步证实mongersen可通过抑制Smad7蛋白的表达发挥抗炎作用。
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