【摘 要】
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根据NCBI公布的禽内源性反转录病毒ALVE1序列设计引物，以SPF鸡胚制备的成纤维细胞为生物材料，建立了ALVE基因序列分析、甲基化水平和转录表达检测方法.以鸡胚成纤维细胞CEF
【机 构】
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扬州大学动物科学与技术学院 江苏 扬州 225009
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根据NCBI公布的禽内源性反转录病毒ALVE1序列设计引物，以SPF鸡胚制备的成纤维细胞为生物材料，建立了ALVE基因序列分析、甲基化水平和转录表达检测方法.以鸡胚成纤维细胞CEF和巨噬细胞系(HD11)两种细胞基因组DNA为模板，通过PCR扩增获得了1912bp的扩增产物，测序后与内源性ALVE1序列比对，核苷酸同源性高达98％以上，说明扩增产物为内源性病毒序列.同时，利用焦磷酸测序分析LTR片段甲基化水平.结果显示：LTR在非免疫细胞CEF中的甲基化水平显著高于巨噬细胞系HD11.最后，利用常规RT-PCR和荧光定量PCR在两种细胞均检测到禽内源性反转录病毒LTR基因、gag基因、pol基因和env基因的转录表达.本研究为今后分析禽内源性反转录病毒ALVE功能提供了方法，同时也为深入研究禽内源性反转录病毒ALVE表观遗传学调控机制奠定了基础.
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