【摘 要】
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[目的]构建癌基因高表达肝细胞转化模型并应用于间接化学致癌物致癌活性的检测.[方法]在永生化人肝细胞L02中导入第12密码子突变的H-RAS癌基因,构建转化前期细胞株L02-R,
【机 构】
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中山大学公共卫生学院 预防医学系,广东 广州 510080
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[目的]构建癌基因高表达肝细胞转化模型并应用于间接化学致癌物致癌活性的检测.[方法]在永生化人肝细胞L02中导入第12密码子突变的H-RAS癌基因,构建转化前期细胞株L02-R,在此基础上继续导入猿猴病毒SV40小T抗原(ST),构建转化细胞株L02-RST,使其作为整个实验的阳性对照.选择具有代表性的间接致癌物黄曲霉毒紊B1(Aflatoxin B1,AFB1)作用于永生化(L02)和转化前期(L02-R)细胞株,采用三种代谢系统：高表达代谢酶P450 CYP1A2,低剂量底物诱导和加入S9代谢系统,通过软琼脂克隆形成试验和裸鼠皮下成瘤试验来比较在不同的代谢活化系统下,癌基因高表达的肝细胞株(L02-R)检测间接化学致癌物致癌活性的效能.[结果]经过蛋白印迹验证高表达细胞株L02-R构建成功.L02-R只在软琼脂中形成少数背景克隆,但不能在裸鼠皮下形成肿瘤.在此基础上继续导入ST后的细胞株L02-RST能够在软琼脂中形成克隆,在裸鼠皮下成瘤.在没有任何代谢系统的情况下,经0.1μM和3 μM AFB1染毒后L02-R细胞在第17周和14周发生转化,而对照组细胞L02-V在染毒17周仍未能发生转化.加入S9代谢系统,0.03 μM和0.1 μM AFB1诱导L02-R细胞在第17周和8周发生转化,在低剂量诱导和高表达CYP1A2的条件下,0.1μM AFB1均使L02-R在第11周发生转化,而对照组细胞L02-V在第17周仍未能发生转化.虽然在加入S9时,3μM AFB1能够使L02-V在第14周发生转化,但在同样条件下,L02-R在第5周已经转化.[结论]癌基因高表达的L02-R细胞转化模型可大大缩短试验间期,有望应用于环境致癌物的筛查及化学致癌机制的研究.
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