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为构建柔嫩艾美耳球虫沉默信息调节因子2(Eimeria tenella silent information regulator 2,EtSIR2)的真核表达质粒,以柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子cDNA为模板,PCR扩增出EtSIR2基因,PCR产物经酶切回收纯化目的片段后与经相应酶切的真核表达载体pCAGGs连接,连接产物经PCR和酶切鉴定,再经测序鉴定正确后,分别转染DF-1细胞和BHK细胞进行表达,分别用Western blot和间接免疫荧光鉴定EtSIR2基因的表达情况.结果,成功扩增了EtSIR2基因,长度为909 bp,Western blot可见大小约为37 kDa的表达蛋白条带,间接免疫荧光可以检测到特异性绿色荧光,表明成功构建了EtSIR2的真核表达质粒pCAGGs-EtSIR2,并能在哺乳动物细胞和禽类细胞中表达.将构建的重组质粒pCAGGs-EtSIR2、重组蛋白EtSIR2、空质粒pCAGGs分别免疫7日龄雏鸡,同时设置非免疫攻虫组和非免疫非攻虫组.14天后进行二免,二免后第7d除了非免疫非攻虫组之外,其余各组用柔嫩艾美耳球虫上海株孢子化卵囊1×104进行攻虫,检测鸡的增重、盲肠病变记分、卵囊产量等生理指标.同时,在不同时间段采血和脾脏,分别进行抗体水平和淋巴细胞增殖与亚群的检测,通过多个指标进行免疫效果评价.结果显示,重组质粒对免疫期间的增重影响最小.重组质粒组攻虫后的增重与健康非免疫组相当,明显高于攻虫非免疫组(p＜0.05),而重组蛋白组与攻虫非免疫组差异不显著(P＞0.05).重组质粒组和重组蛋白组的病变记分和卵囊减少率相当,均明显低于攻虫非免疫组(p＜0.05).重组蛋白组在首免14d、二免7d、攻虫后4d和7d的抗体水平均明显高于健康非免疫组,而重组质粒组在首免14d与健康对照组相当,二免7d、攻虫后4d和7d明显高于健康非免疫组.在二免后7d,重组质粒组和重组蛋白组的的脾脏淋巴细胞增殖水平和CD3+T淋巴细胞水平相当,均显著高于健康非免疫组(P＜0.05)；重组蛋白组CD4+/CD3+T淋巴细胞水平显著高于其余各组(P＜0.05),而其余各组之间差异不显著(P＞0.05)；各组之间CD8+/CD3+T差异不显著.结果表明,重组质粒和重组蛋白对感染球虫鸡均具有一定的保护效果,但在生理指标方面,重组质粒组稍好于重组蛋白组,而重组蛋白在诱导抗体水平和T淋巴细胞水平方面稍优于重组质粒组.