【摘 要】
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在胚胎发育过程中左右不对称发育对于心脏的环化、瓣膜形成和房室分隔等都非常重要,左右不对称的缺陷会引起错位导致的各种器官功能上的异常.我们发现HLRA基因可能与左右
【机 构】
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湖南师范大学心脏发育研究中心,长沙,410081
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在胚胎发育过程中左右不对称发育对于心脏的环化、瓣膜形成和房室分隔等都非常重要,左右不对称的缺陷会引起错位导致的各种器官功能上的异常.我们发现HLRA基因可能与左右不对称发育有关.以斑马鱼为模型,通过对HLRA的表达研究发现斑马鱼胚胎发育到6-8体节的时候,HLRA在Kupffers vesicle特异表达,到10-15体节的时候在侧板中胚层特异表达,到22体节的时候在心脏表达,这种特殊的表达模式提示HLRA基因可能与心脏发育有关.利用心脏组织特异表达的转基因斑马鱼品系(Tg：：NPPA),用反义寡聚核苷酸技术敲低和过表达HLRA都能导致心脏向左环化或者没有环化,导致左右不对称发育发生异常.为了进一步证实这个结果,我们利用原位杂交技术,用心脏发育特异性标志基因Cmlc2、NPPA、Bmp4的anti-sense RNA作为探针,结果显示与转基因斑马鱼的结果一致,通过进一步的研究发现：HLRA能够导致左右不对称发育的标志基因如spaw、pitx2、lefty1、lefty2的时空表达模式发生紊乱,进一步证实了HLRA能够调控左右不对称发育.Tubulin为微管蛋白,研究表明该蛋白在调控左右不对称发育的时候起着关键的作用,当tubulin的表达发生异常时,会导致左右不对称发育出现紊乱,我们用免疫荧光实验证明HLRA能够调控tubulin的表达；利用western blot技术,在蛋白质水平检测HLRA对Nodal信号途径的成员的影响,发现HLRA确实能够激活Nodal信号途径,从而调控左右不对称发育.结论：综上所述,该研究表明HLRA在左右不对称发育起着重要的作用.
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