【目的】建立实时荧光定量PCR检测小鼠IFN-α和IRF7及Mxl基因mRNA表达的方法,为中药抗病毒研究中相关基因表达的定量分析奠定基础。【方法】以TRIZOL裂解抽提法提取小鼠肺脏组织总RNA,根据GenBank上小鼠IFN-α和IRF7及Mxl基因的序列,在保守区域设计并合成小鼠IFN-α和IRF7及Mxl基因引物,以RT-PCR法制备IFN-α和IRF7及Mxl基因的目的片段进行扩增和琼脂糖凝胶回收纯化,将PCR产物与pEASY-T3载体连接,转化到Trans-T1感受态细胞中,过夜培养后采用蓝白斑筛选法挑选出单克隆重组阳性菌落,37℃过夜振荡培养后提取菌液质粒,测定质粒浓度,质粒经10倍梯度稀释后作为标准品模板,采用SYBR GreenⅠ染料以建立实时荧光定量PCR扩增得到标准曲线。【结果】该方法建立的标准曲线,Ct值与标准品稀释度在1×10~2～1×10~8copies/μL范围分别呈良好的线性关系,相关系数r~2均大于0.990,熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰。【结论】本试验建立的检测小鼠IFN-α和IRF7及Mxl基因的实时荧光定量PCR法,具有扩增效率高、CT值线性检测范围广、检测周期短和高通量(一次可以同时检测96个样本)的特点,为在mRNA水平对小鼠IFN-α和IRF7及Mxl基因的定量分析奠定了基础。