【摘 要】
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磷酸化修饰参与多种信号转导途径,磷酸化修饰位点的鉴定对于蛋白质功能和上下游调控通路的研究具有重要意义.本文通过柠檬酸辅助的多步Ti02富集方法我们实现了多磷酸化肽和单
【机 构】
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北京大学生命科学学院,蛋白质与植物基因研究国家重点实验室,北京100871
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磷酸化修饰参与多种信号转导途径,磷酸化修饰位点的鉴定对于蛋白质功能和上下游调控通路的研究具有重要意义.本文通过柠檬酸辅助的多步Ti02富集方法我们实现了多磷酸化肽和单磷酸化肽的分步富集,结合质谱进行磷酸化修饰位点鉴定,提高了多磷酸化肽的鉴定率,其中多磷酸化多肽的鉴定效率可提高3倍以上,总的磷酸化多肽鉴定效率可提高20％以上,在细胞和组织样品中可大规模鉴定磷酸化修饰位点.在Hela细胞模型中鉴定出15,713个磷酸化修饰位点;在神经干细胞定向分化过程中鉴定出11,629个磷酸化肽和3,046个磷酸化修饰蛋白;在DNA复制起始蛋白复合物中鉴定出dna2上的与功能表型密切相关的磷酸化修饰位点.
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