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目的:构建RhoC-siRNA真核表达载体并检测其基因沉默效果,为深入研究RhoC基因在肿瘤中的生物学作用提供有效手段。
方法:将携带红色荧光报告基因的pU6mRFP载体与RhoC基因干扰片段连接,转染人肝癌细胞Bel7402,激光共聚焦显微镜检测转染效率,RT-PCR和Western blot方法鉴定RhoC基因干扰效果。
结果:经HindⅢ和KpnⅠ双酶切鉴定及测序结果证实,重组载体pU6mRFPRhoC–siRNA构建成功,转染效率为70%,RT-PCR和Western blot方法检测RhoC基因沉默效率分别为85%和82%。
结论:重组载体pU6mRFPRhoC–siRNA可有效沉默人肝癌Bel7402细胞RhoC基因的表达。