RhoC-siRNA真核表达载体的构建

来源 :第四届海峡两岸一般外科学术研讨会暨中国临床普外科前沿与争论高峰论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:infoerp2009
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目的:构建RhoC-siRNA真核表达载体并检测其基因沉默效果,为深入研究RhoC基因在肿瘤中的生物学作用提供有效手段。 方法:将携带红色荧光报告基因的pU6mRFP载体与RhoC基因干扰片段连接,转染人肝癌细胞Bel7402,激光共聚焦显微镜检测转染效率,RT-PCR和Western blot方法鉴定RhoC基因干扰效果。 结果:经HindⅢ和KpnⅠ双酶切鉴定及测序结果证实,重组载体pU6mRFPRhoC–siRNA构建成功,转染效率为70%,RT-PCR和Western blot方法检测RhoC基因沉默效率分别为85%和82%。 结论:重组载体pU6mRFPRhoC–siRNA可有效沉默人肝癌Bel7402细胞RhoC基因的表达。
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