【摘 要】
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作为一类广泛存在于真核生物内的非编码功能RNA,miRNAs(内源小RNA)可以基于其自身序列特异的结合并降解mRNAs,从而在转录后水平调控基因的表达.目前对于某些miRNA的调控机制
【机 构】
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东北林业大学生命科学学院,哈尔滨150040
【出 处】
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中国动物学会细胞与分子显微技术学分会第十七次学术研讨会
论文部分内容阅读
作为一类广泛存在于真核生物内的非编码功能RNA,miRNAs(内源小RNA)可以基于其自身序列特异的结合并降解mRNAs,从而在转录后水平调控基因的表达.目前对于某些miRNA的调控机制、调节功能的研究仍存在许多不足,其限制因素主要是缺乏针对特异miRNA的高效敲除或敲低手段.目前,一种可以在多种真核细胞中特异、高效的DNA编辑工具CRISPR系统己被报道,该系统可以在gRNA的指导指导下在基因组DNA中产生双链断裂.然而这种针对编码基因的敲除或敲低方法,是否能有效阻抑非编码的miRNA的表达还未被证实.为此,我们首先构建了含有组成型shRNA(短发卡小RNA)及其靶片段荧光基因融合蛋白的报导细胞系,该系统能够通过荧光强度直观的体现shRNA的表达量.为了验证假设,我们在分别针对3个外源shRNA、2个miRNA行了相应的CRISPR/Cas9载体转染试验.结果表明,应用该策略可以有效阻抑所有目的shRNA和miRNA的表达.为了进一步验证其抑制效果的广泛性,我们又在猪源细胞系上进行了类似试验,证实了该策略的可行性.
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