【摘 要】
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本研究以实验室筛选到的一株新金分枝杆菌(Mycobacterium neoaurum ZJUVN)为出发菌株,采用N+离子束注入诱变,旨在选育能够高效单产产物雄甾烯酮(AD)的菌株.当诱变能量为10Kev,剂量为100×2.6×1013 ions/cm2时,致死率可达到71.38％.通过平板分离纯化和摇瓶转化筛选,得到一株突变菌株ZJUVN-08,该菌株可降解植物甾醇生产单一产物雄甾烯酮(AD),
【机 构】
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浙江大学生物系统工程与食品科学学院 杭州 310058
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本研究以实验室筛选到的一株新金分枝杆菌(Mycobacterium neoaurum ZJUVN)为出发菌株,采用N+离子束注入诱变,旨在选育能够高效单产产物雄甾烯酮(AD)的菌株.当诱变能量为10Kev,剂量为100×2.6×1013 ions/cm2时,致死率可达到71.38％.通过平板分离纯化和摇瓶转化筛选,得到一株突变菌株ZJUVN-08,该菌株可降解植物甾醇生产单一产物雄甾烯酮(AD),没有雄甾烯二酮(ADD)的生产.经10次传代稳定性试验,证明该菌株具有良好的遗传稳定性.摇瓶发酵转化结果表明,当以吐温80为助溶剂(5％),底物浓度为5g/l,pH为7,摇床转速200rpm,转化时间为120h,可得到单一产物AD 1.37g/l,摩尔转化率达到38.85％,比出发菌株提高了74.6％.通过N+离子束注入诱变,菌株的生产性能得到明显改善,并能有效获得单一产物AD.原因可能是N+离子束注入菌体后,甾体C1,2脱氢酶活力丧失,使得AD不能进一步降解成ADD,有利于后续发酵液中产物的分离提取.
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