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O-GalNAc糖基化是一种重要的蛋白质糖基化形式,参与维持细胞正常生理功能,且与多种疾病的发生发展密切相关。催化蛋白质O-GalNAc糖基化的多肽：N乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAc-T)家族,将供体UDP-N-乙酰氨基半乳糖(UDP-GalNAc)的N-乙酰氨基半乳糖基连接到受体蛋白的丝氨酸或苏氨酸的羟基上形成GalNAc-Ser/Thr初始结构。因此,寻找ppGalNAc-T酶的抑制剂可以为研究蛋白质O-GalNAc糖基化的功能与机制提供重要工具。然而目前对ppGalNAc-T酶抑制剂的研究尚处于起步阶段,缺少效果明显且抑制机理明确的特异性抑制剂。在前期工作中,我们通过高通量筛选策略以及基于HPLC的体外酶活检测,发现了一种天然小分子化合物对ppGalNAc-T2酶的酶活具有良好的抑制效果。本课题以阐明该化合物对ppGalNAc-T酶的抑制机理为目标,运用表面等离子共振技术(Surface Plasmon Resonance,SPR)、基于HPLC的体外酶活检测等方法解析了该化合物对ppGalNAc-T酶的抑制机理,发现该化合物是一种针对多肽底物EA2的竞争型抑制剂(IC50=15 μM),与多肽底物竞争ppGalNAc-T的结合位点。同时在Jurkat细胞中,我们利用凝集素印记、基于凝集素的流式细胞检测以及细胞荧光染色等方法验证了该化合物在细胞内能够选择性抑制细胞整体的O-糖基化,但是对N-糖基化无明显抑制作用。本课题为研究蛋白质O-GalNAc糖基化提供了一种有效的小分子抑制剂工具。