万古霉素糖基转移酶GtfE的克隆表达与体外活性检测

来源 :上海市药学会抗生素专业委员会首届青年学术论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liongliong418
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  目的:克隆并异源表达万古霉素糖基转移酶基因gtfE,建立其转糖反应的体外测活方法。方法:从万古霉素总DNA中克隆糖基转移酶基因gtfE,并连入pET37b构建表达载体和菌株,将表达的重组蛋白以亲和色谱分离纯化,用LC-MS检测其活性。结果:成功建立了万古霉素糖基转移酶基因gtfE体外转糖反应模型,该模型可以体外转化尿苷二磷酸葡萄糖,LC-MS确定为葡萄糖万古霉素;但不能转化鸟苷二磷酸D型廿露糖。结论:异源表达的万古霉素糖基转移酶GtfE具有良好的活性,其体外测活方法快捷可靠,为获得糖基多样性的万古霉素打下基础。
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