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蜡蚧轮被菌(Verticillium lecani)是一种重要的昆虫病原真菌,属于丰知菌亚门,寄主范围广泛,能寄生蚧类、蚜虫类、螨类和粉虱,还可寄生鳞翅目的一些害虫及线虫、蓟马等,并且可以通过重寄生的方式来能防治锈病、白粉病、灰霉病和线虫病等植物病害,研究其致病机制对防治植物病虫害及其应用具有重要意义。胞外分泌类枯草杆菌丝氨酸蛋白酶在蜡蚧轮枝菌寄生害虫及真菌过程中可能起到重要作用。本研究将蜡蚧轮枝菌在SMCS液体培养基中恒温摇培后,培养滤液经硫酸铵分级沉淀、Phenyl-Sepharose Fast Flow疏水层析、DEAE-SepharoseFast Flow阴离子交换柱层析、CM-Sepharose FastFlowPEI离子柱层析获得了SDS-PAGE谱带单一的蛋白酶,其相对分子质量为38KDa,初步鉴定其为类枯草杆菌丝氨酸蛋白酶。通过该蛋白酶的理化性质及生物学特性研究表明,其反应最适温度为37℃,最适pH为9.0,Ca2+、M93+等金属离子均对该酶有激活作用,蛋白酶对串珠镰刀菌(Fusariura moniliforme),玉米大斑病菌(Exseroh#um turcicum),柑桔青霉病菌(Penicillium italicum)等有不同程度的抑制作用。在GenBank中查询类枯草杆菌类Prl蛋白的保守序列设计引物,通过RT-PCR扩增得到其完整开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)序列,命名为Vlprl。此序列长为1134bp,编码378个氨基酸,分子量为38.6KDa，并对VIPr-1蛋白构建系统进化树进行生物信息学分析,发现其为确性蛋白,与球孢白僵菌CDEP蛋白和金龟子绿僵菌中Prl蛋白亲缘关系较近.推测其与昆虫病原真菌侵染昆虫有关.而后构建其原核表达栽体pET-28a-Vlprl,并成功诱导了其在大肠杆菌BL2l(DE3)中的表达,SDS-PAGE检测该蛋白和理论预测的大小一致,表明VlPrl在大肠杆菌中得到了正确表达。