【摘 要】
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以洛阳红牡丹(Paeonia suffuticosa Andr.)新鲜叶片总DNA为模板,用高保真DNA聚合酶KOD-plus成功扩增出PCR目标产物PsgACS.PCR产物经回收、3端加A后与pMD18-T克隆载体连接,连
【机 构】
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河南科技大学农学院,洛阳市牡丹生物学重点实验室,洛阳471003
【出 处】
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中国园艺学会观赏园艺专业委员会2011年学术年会
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以洛阳红牡丹(Paeonia suffuticosa Andr.)新鲜叶片总DNA为模板,用高保真DNA聚合酶KOD-plus成功扩增出PCR目标产物PsgACS.PCR产物经回收、3端加A后与pMD18-T克隆载体连接,连接产物转化大肠杆菌DH5α.经菌落PCR初筛及XbaⅠ酶切进一步鉴定,挑选2个阳性重组子用于测序.测序结果表明PsgACS全长2 251bp,GenBank登录号为FJ769773;与mRNA序列比对分析表明PsgACS含有4个外显子和3个内含子,剪接位点均为保守的5供位GU与3受位AG模式;4个外显子居于1-174、267-398、483-643、1240-2251,共编码492氨基酸.生物信息学分析表明,牡丹ACS蛋白分子量为54.9kD,等电点pI为6.8;不存在跨膜域,为亲水蛋白,定位于细胞质;不含信号台,属非分泌蛋白;预测其为不稳定蛋白.
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