【摘 要】
：
目的 构建乙型肝炎病毒(HBV)中国株及其拉米夫定耐药相关变异株的重组杆状病毒. 方法 将1.2倍HBV基因组(血清adr型、基因C型)连接至杆状病毒的转移载体pFastBacI上,然后转
【机 构】
：
上海市瑞金医院感染科,200025
【出 处】
：
第五届全国肝脏病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议
论文部分内容阅读
目的 构建乙型肝炎病毒(HBV)中国株及其拉米夫定耐药相关变异株的重组杆状病毒.
方法 将1.2倍HBV基因组(血清adr型、基因C型)连接至杆状病毒的转移载体pFastBacI上,然后转化入DH10Bac菌株中,在细菌内的辅助质粒辅助作用下与杆状病毒基因组Bacmid发生位点特异性转座,形成含有HBV基因组的重组Bacmid,转染昆虫sf9细胞后,包装产生HBV重组杆状病毒vAcHBVc.采用连续PCR引入方法进行定点突变,构建YVDD变异株质粒,并按照上述方法构建HBV YVDD变异株重组杆状病毒vAcHBVYVDD,扩增并滴定.为便于观察重组杆状病毒的转染和扩增效率及病毒滴度测定,同时构建了含绿色荧光蛋白的HBV重组杆状病毒vAcGFPHBVc.
结果 HBV野毒株和变异株重组杆状病毒均构建成功,通过免疫空斑及TCID50定量测定病毒滴度为106～108 pfu/ml左右.
结论 应用Bac to Bac杆状病毒表达系统可有效快速地构建HBVC型重组杆状病毒,以用于HBV体外复制系统的建立,为HBV野毒株及变异株生物学特性的研究及抗病毒药物的筛选提供技术平台.
其他文献
术后恶心呕吐(PONV)是常见的术后并发症,使病人的术后恢复期满意度下降,并可导致进一步不良后果.虽然经过不断研究并出现了新型治疗药物,但高危病人PONV的发生率可高达70-80％.
全身麻醉药物的中枢作用部位尚无最终定论,但已基本明确全身麻醉药主要影响突触传递功能,通过抑制兴奋性突触传递和增强抑制性突触传递产生麻醉作用.麻醉药对神经元突触膜受
梳头梳头是脑部运动最理想的项目,它可以刺激穴位, 增强分泌活动,改善血液循环,促进新陈代谢。此外。梳头还是治疗失眠、眩晕、心悸、中风后遗症和青少年白发的辅助手段。平
随着对失血性休克本质的认识加深,强调控制病因是治疗的根本措施,早期液体治疗是重点.只有恢复血容量才能提高失血性休克的治疗效果,降低病死率.本文探讨了失血性休克的液体
气管、支气管以及隆突肿瘤患者手术治疗时,麻醉期间呼吸管理是麻醉科、胸外科非常棘手的问题.气管、支气管以及隆突既是手术部位,也是麻醉通气管理的关键器官,如何保证呼吸道
我市创建爱婴医院已经10年,为了解本社区近年来母乳喂养状况及影响因素,进行以下调查。
据估计,全球平均气温升高1℃,气候带约向极地方向推移100km,但这种推移不可能是均匀的.广东省是气候带比较丰富的省份,自南到北,跨越了北热带、南亚热带和中亚热带.随着气候
肩关节痛是常见疾患,正确诊断和治疗是解决病人痛苦的前提,本文介绍了肩关节的解剖结构以及肩关节痛诊疗的研究进展.
目前,在国内的大中城市,麻醉医师已成为慢性疼痛诊疗的主力军.但麻醉医师在慢性疼痛治疗工作中,往往只注重药物治疗、神经阻滞或介入治疗而忽略了药物、行为、心理和康复有机
血栓弹性图(Thromboelastography,TEG)是一种从整个动态过程来监测凝血过程的分析方法方法.本文介绍了血栓弹性图的临床应用.