【摘 要】
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为定量检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)载量,建立PEDV的Real-time PCR方法.用RT-PCR方法扩增出PEDV的M基因片段,并克隆到PUC-T simple载体中,成功构建含有M基因片段的重组质粒.用
【机 构】
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北京农学院动物科学技术学院,北京 102206
【出 处】
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2013年中国畜牧兽医学会养猪学分会学术研讨会
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为定量检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)载量,建立PEDV的Real-time PCR方法.用RT-PCR方法扩增出PEDV的M基因片段,并克隆到PUC-T simple载体中,成功构建含有M基因片段的重组质粒.用该重组质粒进行SYBR Green I real-time PCR,建立了定量检测PEDV核酸的标准曲线与直线回归方程.结果显示,该方法的线性关系良好,相关系数达0.999以上;最低可检测到至少5.56×102拷贝/μL的核酸模板;重复性试验的变异系数小于4％;对猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型等常见猪源病毒均检测不到荧光信号;对临床样品的检出率高于常规PCR方法.结果表明,建立的real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可用于PEDV的检测与定量分析.
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