【摘 要】
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砂梨离体植株中富含单宁、多糖,在提取核酸时易污染,使其降解,提取质量差.因此,本研究对砂梨离体植株不同部位材料核酸提取进行了不同方法的效果比较,旨在确定用于提取砂
【机 构】
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华中农业大学植物科学技术学院/湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室/农业微生物学国家重点实验室,武汉430070
【出 处】
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中国植物病理学会2014年学术年会
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砂梨离体植株中富含单宁、多糖,在提取核酸时易污染,使其降解,提取质量差.因此,本研究对砂梨离体植株不同部位材料核酸提取进行了不同方法的效果比较,旨在确定用于提取砂梨不同部位组织部位获得高质量的核酸提取效果最佳方法.以砂梨离体植株"金水2号"叶片和茎秆为材料,采用改进的CTAB、实验室建立的SDS-过柱法(专利号：ZL2010 10509840.2)和Trizol(Invitrogen公司)法提取样品核酸总RNA.结果表明,采用Trizol法,样品上样量超过0.1g,核酸降解；叶片样品上样量最适为0.05g左右,裂解于1mL溶液中,电泳可清楚观察到28S、18S和5S三条核糖体RNA完整带型,无DNA条带污染,OD260/OD280值都在1.8 ～2.0,无蛋白污染,质量好.提取茎秆部位样品,电泳检测无完整的核酸RNA条带,总RNA均存在不同程度的降解.采用SDS-过柱法提取总RNA,琼脂糖电泳可以看出叶片、茎尖、茎秆中部和茎基部组织材料所提取的RNA完整性都很好,没有拖尾现象,但却有较高浓度的基因组DNA污染.对比Trizol方法和SDS-过柱法,本研究采用了CTAB法提取"金水2号"叶片和茎秆的茎尖、中部和基部组织样品,最适上样量为0.05 ～0.1g/mL.电泳可清楚观察到28S、18S和5S三条核糖体RNA,带型完整,无可见条带的DNA污染,紫外分光光度计检测OD260/OD280值也均在1.8 ～2.0,无蛋白污染.结果表明,采用CTAB法可以有效提取其砂梨离体组织不同部位总RNA,用于病毒检测及其RNA-sequence转录组测序等后继试验研究.
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