【摘 要】
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目的:构建人肠三叶因子(human intestinal trefoil factor,hITF,TFF3)真核表达载体,并观察其在CHO/dhfr-细胞中的表达。方法:通过重叠延伸PCR法获得hITF cDNA片段,将目的基因
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目的:构建人肠三叶因子(human intestinal trefoil factor,hITF,TFF3)真核表达载体,并观察其在CHO/dhfr-细胞中的表达。方法:通过重叠延伸PCR法获得hITF cDNA片段,将目的基因插入真核表达载体pIRES/dhfr,得到重组载体质粒pIRES/hITF/dhfr;经脂质体介导转染CHO/dhfr-细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的CHO/dhfr-细胞系;用RT-PCR及ELISA法检测hITF的表达。结果:成功构建了真核表达载体质粒pIRES/hITF/dhfr,并建立了稳定转染的CHO细胞系,成功地表达了目的基因。结论:成功构建了真核表达载体质粒pIRES/hITF/dhfr,并在CHO/dhfr-细胞中分泌表达hITF蛋白,为进一步重组hITF的临床前研究奠定良好的实验基础。
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