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WRKY家族是高等植物中十个最大的转录因子家族之一,它们在绿色植物中广泛存在。水稻WRKY基因的功能广泛地涉及了由病原细菌和真菌等引起的病害反应及水杨酸(SA)和茉莉酸(JA)相关的信号通路,在水稻抗病虫害及抗逆过程中发挥着重要的作用。因此,研究WRKY转录因子的作用机理具有理论和实践意义。OsWRKY45是水稻中第Ⅲ组WRKY转录因子,拥有1个典型的WRKY结构域和C2HC型锌指结构。其中WRKYGQK保守序列的和锌指结构在这一相互作用中起到重要的作用。研究表明尽管W-box(T/CTGACC/T)的核心序列一致,但是邻近的侧翼序列对WRKY蛋白核酸位点的偏好性也有影响。虽然有单独WRKY晶体结构的信息,相互作用的信息尚不完整等本研究利用原核表达系统,将编码OsWRKY45全长和截断体基因分别构建到不同的表达载体,并将构建好的载体分别转化到大肠杆菌BL21(DE3)、Rosetta-gami(DE3)等表达菌株表达。通过小量诱导、试纯化筛选到合适的载体、表达菌株和纯化条件。在此基础上,通过亲和层析、离子交换和分子筛得到稳定、均一的蛋白,符合晶体生长。同时,利用凝胶迁移实验(Electrophoretic mobility shift assays,EMSA)分析了与WRKY45特异性结合的DNA序列,并将筛选到特异结合的DNA与WRKY45蛋白样品混合制备蛋白质和DNA的复合物,利用气相扩散法对复合物进行晶体生长,获得了复合物晶体,并收集了衍射数据,正在进行晶体结构解析和WRKY45与W-box相互作用原理以及在DNA结合序列上偏好性的分析,以解释W-box侧翼序列对WRKY蛋白核酸位点的偏好性的影响。