蛋白同化激素是一类合成睾酮衍生物,从1976年开始就已经被列入禁用物质清单.其中康力龙(通用名:司坦唑醇)是运动员最常使用的蛋白同化制剂.其常规检测手段是将尿样水解后采用气质联用(GC-MS/MS)或液质联用(LC-MS/MS)测定其羟基化Ⅰ相代谢物,如3-羟基-康力龙.由于康力龙在体内代谢复杂多变,并且多以Ⅱ相代谢物形式存在,因此有必要深入开展其体内代谢研究,发现新的能够在足够长的时间内检测到的代谢物,尤其是Ⅱ相代谢物作为检测对象,不仅可以简化样品前处理过程,还可以进一步延长康力龙的检测窗口期,从而有效控制康力龙滥用.多反应监测(MRM)是三重四级杆质谱的一种扫描方式,通过同时监测化合物母离子和通过碰撞诱导解离(CE)后产生的子离子进而灵敏检测复杂基质中的痕量物质.康力龙及其代谢物通过MRM中可以产生与其结构特点相匹配的特征子离子,如3-羟基取代的康力龙可产生m/z97的特征子离子.因此根据可能的Ⅰ相和Ⅱ相代谢反应类型设定母离子,以这些特征离子作为子离子,通过MRM扫描可以在尿样中全面寻找康力龙的代谢物,特别是未知的和浓度低的代谢物. 本研究建立了简便易行的无需酶解和衍生化，直接采用液液萃取和固相萃取技术的尿样前处理方法以及快速灵敏的高效液相色谱—三重四级杆质谱联用分析方法用于康力龙及其代谢物的发现和检测。采用MRM策略共发现康力龙I相代谢物35种，Ⅱ相代谢物21种，其中19种I相代谢物和19种Ⅱ相代谢物未见文献报道。涉及的I相代谢反应类型包括单羟基化、双羟基化、三羟基化、脱氢、醇脱水、亚甲基成酮、脱甲基、甲基化、差向异构、甲基成羧基等；Ⅱ相代谢反应类型包括硫酸酯化、葡萄糖醛酸结合等。其中包括脱氢康力龙、康力龙葡萄糖醛酸结合物等10种代谢物在体内长时间残留，可以检测到停药后22天。通过对康力龙体内代谢研究，发现并鉴定了多个新的代谢物和长时间残留代谢物，有效拓宽了康力龙的检测窗口期，延长了其追溯检测时间。另外，采用高效液相色谱—三重四级杆质谱联用技术结合MRM策略可以有效发现具有复杂体内代谢特点的蛋白同化激素未知的和低浓度的代谢物，显著增强这类禁用物质的检测能力，从而有效控制蛋白同化激素的滥用，保证竞技体育的公平公正和运动员的身心健康。